关于流式绝对计数小白有很多问号

Danni

最近想使用赛默飞的计数微珠，但是有很多问题不太明白想请教大家：

1.这种方法是不是可以只上部分样品就能推算整个样品的细胞量了？比如我有1ml全血，现在我只用上50μL就能推算？对占比很低的细胞有没有影响？
2.500uL的上样体系是不是要全部收尽？

niwanmao

用绝对计数微球的时候，有几个关键点：
1、使用前务必充分混匀。
2、全血和微球，可以采取等体积方法，例如全血加50ul，微球加50ul，等体积的话，后面计算上比较方便，只需要将流式图上细胞数量和微球数量做个比值，就等于 真实的细胞绝对数和微球绝对数的比值。
3、上样体积不需要获取完，因为无论获取多少体积，这个比值都是恒定的。
4、免洗，很关键

wxd

如果待检测细胞占比很低的话，有几个建议：
1. 增大上样体积，对同一个样品收集三次，计算平均值和标准差，标准差/平均值得到变异系数（CV），CRO行业里一般认为细胞比例低于1%的话，CV<35%的检测结果是可以接受的；
2. 增加待检测细胞的数量，判断标准同上；
3. 可以通过向高浓度细胞样品中掺入无关细胞制备低浓度细胞样品，或者向零浓度细胞样品中掺入待检测细胞制备对照品。掺入前检测各混合细胞比例，以便得到理论值，从而与检测值做对比，从而验证检测方法的准确性。