流式细胞术测定针对间充质干细胞的抗体

Echomoon

谢谢大家帮忙看下：我们有个试验，老师让建立流式细胞术法测定大鼠血清中针对间充质干细胞的抗体，原理：以大鼠血清与间充质干细胞室温孵育1h，洗涤离心后去上清，在剩余的细胞悬液中加入荧光标记的抗大鼠IgG抗体，室温避光孵育1h，洗涤离心后去上清，然后上机测定。

给药前

给药后56天

给药后D56对照未给药

目前的结果如上图：给予干细胞前的血清样本没有测到荧光信号；后期大鼠血清样本加入后，都有很强的信号；对照组动物（不给干细胞）血清未测到信号。
困惑：该信号是否能表示大鼠血清中有抗体产生？
以流式细胞术法检测针对干细胞的抗体，这种方法是否适用？问题在哪呢？还能改进吗？


谢谢

niwanmao

Echomoon 发表于 2020-10-15 08:59
倪老师，在王芳老师发表的文献提到：受体NK细胞和树突状细胞均会对干细胞产生免疫反应。同批次未给予干细 ...

血清里面，主要是免疫球蛋白和补体，会与异种细胞发生反应，可能会导致异种细胞凋亡或死亡。
至于你这里的荧光信号，可能是真的，但需要多次重复一致，并且在做的时候排除掉死细胞才行。

niwanmao

间充质干细胞是人的还是大鼠的？
从共孵育这个标本看，似乎细胞活力不好了。

Echomoon

niwanmao 发表于 2020-10-14 21:28
间充质干细胞是人的还是大鼠的？
从共孵育这个标本看，似乎细胞活力不好了。 ...

倪老师好，干细胞是人的。

niwanmao

Echomoon 发表于 2020-10-15 08:39
倪老师好，干细胞是人的。

这样的试验，我记得以前做人血小板抗体的时候，似乎也是类似的。
后续的改进我觉得集中在两个地方：
1、同一份样本，最好能重复多次，每次都是上面那样的差异，就是可信的。
2、每次获取的数据，尽量细胞量多一些，从图上看，感觉一共也没几个细胞。

Echomoon

niwanmao 发表于 2020-10-14 21:28
间充质干细胞是人的还是大鼠的？
从共孵育这个标本看，似乎细胞活力不好了。 ...

倪老师，在王芳老师发表的文献提到：受体NK细胞和树突状细胞均会对干细胞产生免疫反应。同批次未给予干细胞的动物血清样本都是正常的，那是否说明给干细胞后的血清样本中可能存在某些成分（如穿孔素等），导致干细胞活性变差？
那为什么会有荧光信号？

Echomoon

niwanmao 发表于 2020-10-14 17:44
血清里面，主要是免疫球蛋白和补体，会与异种细胞发生反应，可能会导致异种细胞凋亡或死亡。
至于你这里 ...

谢谢倪老师。