补偿调节问题

小白兔

问题1、如图一所示，按照图片做4色分析。FITC发出的荧光只有0.4% 益漏到了PE通道，这种益漏很小的还需要在补偿调节时去除PE中的FITC吗？另外，一般补偿只做相邻通道的，那FITC发出的荧光有1.8%到了PE.cy7，这个还需要在补偿调节时去除PE.cy7中的FITC吗?还是只有黑色圈出的  "X"  这种的才不需要调节补偿，只要有数字就必须调补偿？问题2、我用的机器是BD FACS Aria 2  有488   635 激光， 假如做3色分析，我用 FITC PE APC 替代 FITC PE  PerCP.cy5.5 是不是就可以不用调节"PE-APC"H和"APC-PE"这两个补偿了？

niwanmao

1、这份表格里面，主要是针对BD机器的一些理论值，仅作为选择荧光素的参考。实际应用可能需要微调，或者不同机器会有不同的渗漏水平，所以务必用单染（有阳性峰和阴性峰）的样本调节渗漏。 FITC-PE是由于PE漏到FITC里导致需要从FITC中扣除PE漏过去的部分，这里理论值是1.8，我们在DxFLEX上常用是0.5~0.8％，但是一般都是需要减的，不要小看这1.8％的水平，影响不小的哦。 X的理论上不需调节，但还是那句话，看你们机器的滤光片配置，如果配置不当，可能也需要调。
2、 FITC PE APC 替代 FITC PE  PerCP.cy5.5可以的，理论上不用调。

Yuck

niwanmao 发表于 2021-11-1 08:12
1、这份表格里面，主要是针对BD机器的一些理论值，仅作为选择荧光素的参考。实际应用可能需要微调，或者不 ...

老师有没有补偿操作流程，研究标准一类的文章推荐的

小白兔

niwanmao 发表于 2021-10-31 21:46
1、这份表格里面，主要是针对BD机器的一些理论值，仅作为选择荧光素的参考。实际应用可能需要微调，或者不 ...

老师，您好。还有一个问题就是，比如图一中FITC的散射波长很宽，只有47.4%被FITC 通道接收到。现在假如我要分选发绿色荧光的细胞，选择FITC作为收取通道。是不是代表我阳性的细胞有很多，可是只有47%被我收到了，其他FITC阳性的细胞都浪费了？

niwanmao

小白兔 发表于 2021-11-1 11:56
老师，您好。还有一个问题就是，比如图一中FITC的散射波长很宽，只有47.4%被FITC 通道接收到。现在假如我 ...

不是的，光的波长是一个范围，所有FITC+的细胞均会被检测到，这个你放心，只不过细胞发出的光里面，有部分光子波长超出了滤光片过滤的波长，会被过滤到， 但这个情况是针对所有的细胞发出的光，并非部分细胞。

小白兔

niwanmao 发表于 2021-11-1 15:51
不是的，光的波长是一个范围，所有FITC+的细胞均会被检测到，这个你放心，只不过细胞发出的光里面，有部分 ...

明白了，谢谢倪老师~