请问我的TH17是不是失败了？

丁媛 · 发表于 2022-2-12 16:48:37

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本帖最后由丁媛于 2022-2-12 17:08 编辑

实验步骤：1.用500ul的小鼠全血裂红之后加培养基和刺激剂，放细胞培养箱里面刺激3小时（之前有文章对比3小时和4小时的区别不大，我就只刺激了3个小时）；
2.收集细胞之后用PBS洗涤。洗涤完加500ul多聚甲醛固定半个小时。洗涤完加200ul的1%皂素+抗体IL17A孵育半个小时；
3.用皂素洗涤离心后加PBS重悬上机。(只加抗体IL17A的分群和加了CD4+IL17A的区别不大）

CD4-FITC,IL17A-APC

丁媛 · 发表于 2022-2-12 17:07:02

就是这些

ccx793244586 · 发表于 2022-5-31 00:39:33

电压有问题

niwanmao · 发表于 2022-5-31 09:42:56

之前可能忘记回复了。

用皂素破膜比较难做，需要在处理过程中，全程用皂素。如果改用其它商品化破膜剂仍不行，得看看刺激是否有效？

丁媛 · 发表于 2022-6-2 10:02:26

niwanmao 发表于 2022-5-31 09:42
之前可能忘记回复了。

用皂素破膜比较难做，需要在处理过程中，全程用皂素。如果改用其它商品化破膜剂仍不 ...

小鼠是经过药物处理了的，应该受影响。还有就是裂红之后再培养有很多杂质。做TH系列应该还是用脾脏做比较好，分离的纯一些。

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