小鼠腹腔灌洗液 检测T/B/NK/MAC等

毛豆24821

Hi 各位战友，第一次做小鼠的腹腔灌洗液，有很多疑问，请相关同行指教。
首先C57BL/6小鼠，用5ml PBS灌洗后得到腹水，裂红后染色上机。

下图一是 小鼠腹水，其中Live/dead 部分没有圈右上细胞，虽然这群细胞在前侧向中正好是巨噬的位置，但由于这群细胞表达几乎所有通道，所以没有圈上。
但这样的话腹水里的巨噬比例就太少，只占CD45+的1%左右，也不对劲。

小鼠 腹水 去除可能dead cell

下图二， 也是小鼠腹水，将Live/dead 部分连带右上细胞都圈上，NKT猛增，补偿后确实可以把异常的NKT调节到CD3-CD49b-，但巨噬占CD45+的比例也只有20+%。

小鼠 腹水 全部细胞

放一张图三是 小鼠血液，看上去问题不大，CD49b的通道应该需要换个更亮的。

小鼠 血液

请各位帮忙看看，
1：panel各位觉得有什么必须要改进的地方吗？
2：小鼠腹水的图就长这样吗？巨噬的live/dead为啥这么高，这群细胞的背景值大？我现在觉得是这群很容易染上非特异性，请问大家的腹水也是这样吗？我们的腹水收集方案有需要调整吗？
3：普通小鼠的腹水，不做刺激，CD163比例就是这样吗？谢谢！CD163胞内胞外染都试过，结果差不多。


谢谢！

niwanmao

巨噬细胞的死活染色是比较尴尬的，那部分是需要圈进去的。至于CD163需要其它有经验的站友回答。

scaleus

niwanmao 发表于 2022-3-25 13:24
巨噬细胞的死活染色是比较尴尬的，那部分是需要圈进去的。至于CD163需要其它有经验的站友回答。 ...

倪老师有相关的资料吗 我最近也遇到了肿瘤组织里巨噬细胞全染上了Live/Dead的问题 其他细胞解离后活性都很好

毛豆24821

niwanmao 发表于 2022-3-25 13:24
巨噬细胞的死活染色是比较尴尬的，那部分是需要圈进去的。至于CD163需要其它有经验的站友回答。 ...

只圈dead cell的如图，很奇怪诶，异常表达CD3、CD11c等，为啥？是氨基染料问题吗？换别的染料会不会好一点。

只圈dead cell

niwanmao

毛豆24821 发表于 2022-3-25 19:46
只圈dead cell的如图，很奇怪诶，异常表达CD3、CD11c等，为啥？是氨基染料问题吗？换别的染料会不会好一 ...

巨噬细胞，所有通道的荧光本底都会偏高，所以CD3、CD11c就不能用淋巴的本底来衡量，所以门的位置都得微调。