CD4细胞IFN-g信号为什么这样子

当你老了

倪老师,麻烦您帮我看看，我用的流式仪是BD FACSAria 2,测了IFN-G信号，结果发现CD4细胞的IFN-G信号测不出来，每个样本都这样，我用其他配色用CANTON 2测了是可以测出来的，所以我现在不明白是哪里出问题了，麻烦老师了！

niwanmao

似乎电压整体都偏低。
CD4和CD8的分群不好，上级门是什么？

当你老了

niwanmao 发表于 2019-8-6 22:51
似乎电压整体都偏低。
CD4和CD8的分群不好，上级门是什么？

老师，我是这样画图的，不知道为什么，CD4和CD8在有些样本分的清楚有些分的不清楚。
这个实验做了很多个样本了，现在压力也很大，不知道这是哪里出的问题，麻烦老师帮我看看了

niwanmao

当你老了 发表于 2019-8-8 18:30
老师，我是这样画图的，不知道为什么，CD4和CD8在有些样本分的清楚有些分的不清楚。
这个实验做了很多个样 ...

上级门不纯，建议加一个CD3作为上级门，CD8分群就会清楚起来。
此外，IFN-g染不出来，我觉得可能需要从样本的培养和刺激上面找一下原因先。

当你老了

niwanmao 发表于 2019-8-8 22:33
上级门不纯，建议加一个CD3作为上级门，CD8分群就会清楚起来。
此外，IFN-g染不出来，我觉得可能需要从样 ...

好的 非常感谢老师我也有想过IFN-g染不出来是培养的原因，所以几个样本做对照，就是用同样的细胞，一份只染三个色，另一份染了七个色，因为条件限制，所以三色和七色的在不同仪器上机，结果就是三色的CD4细胞IFN-g染出来了，七色的染不出来。

niwanmao

当你老了 发表于 2019-8-9 08:16
好的 非常感谢老师我也有想过IFN-g染不出来是培养的原因，所以几个样本做对照，就是用同样的细胞，一份只 ...

你这个阳性很奇怪的，扩散的好宽，是否邻近的CD3渗漏过去？

当你老了

niwanmao 发表于 2019-8-11 12:25
你这个阳性很奇怪的，扩散的好宽，是否邻近的CD3渗漏过去？

谢谢老师，我调好补偿了的，可能看起来扩散的宽是因为电压低，导致阴性细胞群挤到一块儿，所以看起来不协调的原因？
对了，差点忘记了，同样的细胞还做了质谱流式，下图是质谱流式数据，CD4和CD8都有表达IFN-g，可是流式测不粗来（泪奔）