JC-1检测结果分析

wangzq1000

请教一下各位老师，JC-1试验的分群方式这样圈可以吗？
CCCP阳性对照组跟对照组相比细胞群为什么没怎么分开呢？



原始文件.zip (3.42 MB, 下载次数: 2)

2024-3-19 16:20 上传

点击文件名下载附件

lifeng0711

我是个流式新人，想到几个地方，抛砖引玉哈：1.  如果是贴壁细胞，培养液可能也需要离心收集离心。2. 没做去黏连，我做了一下也没啥变化。3. 这个如果用两个激光器分别激发几乎没补偿，但是如果都用488激发，在pe通道补偿还是挺大的。放一些未染色的细胞进去，看一下是不是因为补偿或者细胞有自发荧光。4.或者您的结果就是对的，药物和cccp都么有刺激细胞凋亡。

wxd

没分开可能有三种原因：
1.这个细胞系就是这个特点，膜电位下降不明显；
2.试剂盒可能有问题；
3.你做的有问题。
针对这些原因，可以进行验证：
用多聚甲醛杀死细胞，收集沉淀、计数之后和一定数量的正常培养细胞混匀，在做膜电位检测，看看是否分群，分群比例是否正确。
或者换一个品牌的试剂盒试试
或者优化染色方法，比如染色温度、时间，是否清洗等。
如果验证不方便，也可以试试将分析方法换成比较PE通道和FITC通道的平均荧光强度的比值（MFI PE/MFI FITC），比值越高说明细胞活性越高。