固定破膜的时候，离心力应该增大还是减少？

hydwl2019

固定破膜后的细胞数量会急剧减少，应该提高离心力让细胞更多地沉淀下来还是减少离心力让细胞破碎的少一点，正常我都是300g 5min，固定后和破膜后应该怎么办呢

niwanmao

这个离心力并不高

固定破膜后细胞数的减少有很多因素：
1、固定是否充分？未充分固定，会使得破膜时细胞大量被破坏
2、破膜剂的浓度和用量是否正确？
3、离心力这个不大，但是有些离心机的加速、减速如果设置过大，也容易导致细胞损伤


但我个人觉得，前两种因素可能性最大，离心反而可能性偏小，如果离心力过小，反而需要增加时间至10分钟。

潘臻

我也分享一点个人过去的经历。
1. 我们实验室过去在固定之后，会把离心力增加至400g，还是5min。目前为止没有发现什么大问题。
2. 离心力一般确实没有那么大的影响。但我个人遇见过有的小伙伴，在300g离心完后，过于追求吸掉残液，然后出现细胞会损失的情况。这一情况在增加至400g后，是有见到改善的。

zdvfsadb

这个影响应该不大，我平时都是500g 5min，组织分离提取细胞时还用过700g 10min，感觉还行

Yuck

跟离心率关系应该不大，我一般400g3min，固定条件确认过了吗，比如温度，浓度一类。缓冲液有问题吗，会不会固定前缓冲液把细胞涨破了。

lifeng0711

如果你用的是thermo的那个00-5523 破膜固定液，细胞会皱缩很多，必须增大离心力，否则离不下来。我觉得可以固定之后上显微镜看看细胞的形态。

qinhe

要增大，不然细胞下不来，用过700g，小了会细胞很少