控制你的世界——流式实验中各类对照的作用

niwanmao

流式实验检测时，有许多可能发生错误或变异的因素，因此，对这些因素进行质量控制非常重要。
流式细胞术的质控对照主要包括五大类，分别是针对仪器、补偿、设门、数据解读等方面。

一、仪器质控对照
这类对照主要用于监测流式细胞仪的性能。仪器操作者需要定期运行此类对照品。
仪器质控对照主要检测：

• PMT灵敏度
• 鞘液
• 激光延迟
  

这类对照可确保仪器正常运作，以保证标本检测指标不被仪器所干扰。

二、补偿对照
补偿对照用于设置正确的补偿。补偿对照，不管是微球还是细胞，都需要满足以下补偿原则：
（1）对照的亮度需要与目的标本的亮度相似
（2）背景荧光应该与相应参数的阳性、阴性细胞群相同
（3）实验标本和对照标本应该对应
（4）荧光素相同
（5）仪器灵敏度相同
（6）正确的补偿是正确解读数据的关键

三、设门对照
正确的设门对照有助于正确分析目的细胞。最常见的设门对照就是荧光扣除（FMO）对照。


四、非特异性结合对照
非特异性结合（NSB）会降低流式细胞仪检测的敏感性，目前还没有十分完美的对照来检测NSB，但相同克隆号的对照有助于确定非特异性结合水平。
一些研究者仍然把同型对照归为NSB对照，并用这些对照来检测NSB水平，同型对照本质上就是相同亚型但靶位点不同的对照，十分遗憾的是，同型对照实际上用处不大，无法完美反映NSB水平。

五、实验对照
实验对照是最后一类主要的对照，它指的是任何可以确定实验措施是否会导致真正指标变化的对照，这些对照包括：未处理或未刺激的对照（确定背景表达强度）、刺激对照（确定刺激是否有效）、参考对照（常用于长期研究）。

上面这五类对照是否真的都需要？
简要回答：是。
详细点回答：在流式细胞术实验摸索条件、建立方案的过程中，这些对照有助于明确指标的变化来源，所以是必需的。但是，如果实验已经事先得到良好的质量控制，或者抗原表达分群非常清楚（例如CD3等），那么这些对照可以不用。


进一步阅读：
Hulspas et al. (2009)  Considerations for the control of background fluorescence in clinical flow cytometry.  Cytometry B. 76B:355-364