流式前细胞离心的问题？

yamapisama2012

因为样品（小鼠）中细胞少，所以我用了4000rp，离心7min。
但是现在怀疑是不是不妥？
有几个问题想问：
1.离心力大，离心时间长会让细胞死亡么？（有些实验室性的文献有说5000rpm，5min对细胞是没有问题的。）
2.如果是，那么死细胞在沉淀里还是上清里？
3.中性粒细胞对于离心力要求高么？有没有可能其他细胞成分都在，就中性粒细胞离心离没了。。。
4.样品细胞少的时候，怎么解决越洗涤越少的现象？

谢谢！

niwanmao

1、我们平时大多用1500转/分左右，你们平时都用这么高转速吗？离心速度过快肯定会导致细胞死亡。
2、死细胞碎了之后，可能是沉淀，也可能在上清吧，看碎片大小。
3、应该不至于。
4、样本细胞少，就得尽量减少洗涤次数，需要从步骤上想办法，并且在洗涤完成时，用枪头小心吸取上清，并尽量多留一些液体在底部。

yamapisama2012

niwanmao 发表于 2016-11-8 19:42
1、我们平时大多用1500转/分左右，你们平时都用这么高转速吗？离心速度过快肯定会导致细胞死亡。
2、死细胞 ...

离心转速大，除了死细胞多之外会有其他影响么？
难道有些细胞对离心转速敏感么？

时光成熟

样品细胞少的时候 在buffer里面加一点血清 或者BSA就可以了 这样可以防止细胞离心丢失

niwanmao

yamapisama2012 发表于 2016-11-9 12:30
离心转速大，除了死细胞多之外会有其他影响么？
难道有些细胞对离心转速敏感么？ ...

细胞都要转速要求的呀，超过其限度肯定要被离死的。

quinn0926

时光成熟 发表于 2016-11-9 15:43
样品细胞少的时候 在buffer里面加一点血清 或者BSA就可以了 这样可以防止细胞离心丢失 ...

这个是为什么呢？

liuruiluna

你用的是多大半径转子的离心机？只是说rpm不能直接反映离心力的大小。如果怀疑是离心造成的，可以做个对比实验，做几个梯度排除一下是离心造成的还是本来就不大好了