求助！！！Treg分类计数可以固定破膜后一周再染foxp3吗

陈十七

求助！！！由于自己的疏忽没有算好胞内抗体的量，用invitrogen的固定破膜套装破膜、洗涤后发现胞内抗体没了。现在胞内抗体一周内才能到货，我是否可以用4%多聚甲醛固定，胞内抗体到货后再染胞内抗体？
或者有没有其他方法可以弥补，因为我的细胞获取也比较困难，胞膜抗体都染好了，不想就这样浪费了。
求各位师兄师姐、老师指导！

niwanmao

如果已经固定和破膜的话，赶紧将破膜成份洗涤掉，用含1％多聚甲醛的PBS重悬试试，但是一周时间太长，不能保证效果。

如果还有样本，建议在样本里面加流式专用保存液，可以保存3周。

陈十七

niwanmao 发表于 2018-5-23 11:09
如果已经固定和破膜的话，赶紧将破膜成份洗涤掉，用含1％多聚甲醛的PBS重悬试试，但是一周时间太长，不能保 ...

收到！感谢倪老师指导！

陈十七

1%多聚甲醛保存效果还可以的，感谢倪老师指导

niwanmao

陈十七 发表于 2018-7-30 09:49
1%多聚甲醛保存效果还可以的，感谢倪老师指导

不客气。能帮助别人是乐趣

winteran

请问你是表面抗体染完之后，固定破膜以后，一直将细胞悬在1%多聚甲醛中吗？还是说多聚甲醛固定一定时间之后，洗掉，重悬在没有多聚甲醛的流式液里面保存呢？

niwanmao

winteran 发表于 2018-11-18 23:58
请问你是表面抗体染完之后，固定破膜以后，一直将细胞悬在1%多聚甲醛中吗？还是说多聚甲醛固定一定时间之后 ...

一直保存在1％多聚甲醛。

shjfx

niwanmao 发表于 2018-5-23 10:57
如果已经固定和破膜的话，赶紧将破膜成份洗涤掉，用含1％多聚甲醛的PBS重悬试试，但是一周时间太长，不能保 ...

倪老师，我现在有个实验要做foxp3的染色，之前都是用的invitrogen的是结合固定破膜，但是突然发现试剂盒用完了，请问有什么替代的固定破膜方法么？

niwanmao

shjfx 发表于 2019-1-12 16:06
倪老师，我现在有个实验要做foxp3的染色，之前都是用的invitrogen的是结合固定破膜，但是突然发现试剂盒 ...

如果条件已经稳定了，建议把样本提取PBMC冻起来。固定破膜条件一换，容易出问题。