Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡分析求助

绿野LOVE星空

实验中药物促进细胞凋亡，但不知是补偿还是样品问题，总是调节不好图，请大神帮忙调下图，谢谢！

hwthwt

绿野LOVE星空 发表于 2019-8-29 15:22
每个实验一共就2组细胞，对照和药物处理。
1. 我用对照组单染V管，药物处理组单染的PI管（本意这组细胞晚 ...

你这个感觉无从下手……1. FSC/SSC图中只需要圈我圈的那群细胞即可，所以你的增益太小，细胞都挤在一堆
2. 你的单染管非常奇怪。首先看PI单染的，PI阳性群体就分成了2群，但P2和P3门里的细胞实际上都是PI阳性，但不知为何你的分成了2群。据此看药物-双染管的数据，显示P2和P3门颜色的才是真正的PI阳性群
3. 同样还是PI单染管，看起来是PI阴性细胞的P4群体在除了药物-双染管之外的其它管均见不到，因此怀疑并不是PI阴性细胞
4. 只有显示P5门颜色的的群体才是真的阴性细胞
5. P6门里是Annexin V-FITC单阳的细胞，但据此看你的药物双染组就没有了早凋细胞。所以我认为你的药物双染组有问题

我能分析的就只有这么多了……

hwthwt

首先，不能用未加染料组来设门，应用未经药物处理但两种染料都加了的细胞来设阴性门。其次，FSC及SSC的增益太低，细胞都挤在一堆分不开。最后，你单染管的图看起来很奇怪。阳性群体非常少。

niwanmao

分群还行吧，只是门可能只能如下图这样设不规则的：

绿野LOVE星空

hwthwt 发表于 2019-8-28 20:58
首先，不能用未加染料组来设门，应用未经药物处理但两种染料都加了的细胞来设阴性门。其次，FSC及SSC的增益 ...

您好！1. 就是说用对照组（未加药）双染射门；2. 药物处理（促凋亡）后，FSC/SSC图中细胞位置明显发生漂移，这种情况增益调高后，药物组图正好，但对照组细胞都跑轴上了，正常吗，谢谢！

绿野LOVE星空

niwanmao 发表于 2019-8-28 21:32
分群还行吧，只是门可能只能如下图这样设不规则的：

倪老师，这种情况出现是补充没调好吗，或者什么原因最有可能造成这种没法调节到横竖对其的情况，谢谢！

hwthwt

绿野LOVE星空 发表于 2019-8-29 00:01
您好！1. 就是说用对照组（未加药）双染射门；2. 药物处理（促凋亡）后，FSC/SSC图中细胞位置明显发生漂 ...

1.对
2. 给药后散射光图发生明显变化很正常。但你应该反过来，调增益让对照组细胞在散射光图上散开，然后给药组就不要再调了，就用同样的增益，它是什么样就是什么样。有些细胞会飞出去也是正常的，它们本来也不是你应该分析的细胞
3. 你的单染管数据看起来很奇怪，不知道你是用什么方法诱导单染管的细胞凋亡的？

绿野LOVE星空

hwthwt 发表于 2019-8-29 07:53
1.对
2. 给药后散射光图发生明显变化很正常。但你应该反过来，调增益让对照组细胞在散射光图上散开，然后 ...

每个实验一共就2组细胞，对照和药物处理。
1. 我用对照组单染V管，药物处理组单染的PI管（本意这组细胞晚期凋亡会较多，对照组很少）。
2. 药物处理后细胞漂移太多，射门时要圈出很大区域才能同时包含对照和药物组的细胞（FSC/SSC图中），这样射门对不对，能不能帮调节处理下图，目前很怀疑自己处理的结果图，非常谢谢！