流式抗体对细胞会有激活作用吗？

immunology

有一个问题困扰了我很久，流式抗体检测细胞表面的marker会对细胞有激活作用吗？如果有的话，那么检测到的这个细胞就不是最初的我要的状态下的细胞了吧，应该会发生变化了，那么还能反应该细胞的真实生物状态吗？
举个例子，假如造了一个疾病模型，想看对T细胞激活的影响，如果我在收了细胞以后为了检测T细胞肯定要用CD3偶联荧光的抗体，那么这个CD3抗体是不是对本身的T细胞有一个激活作用呢？激活后是不是其实就已经不是疾病模型状态下的T细胞了？T细胞表面的其他marker或者状态会与真实状态下的不同吧？
就这个问题问了一下某大公司的技术支持，说的是流式抗体和激活抗体区别就是流式抗体里面会加叠氮钠，叠氮钠对细胞有毒害作用，因此不能用流式抗体作为激活抗体，并且在短时间内上机不会对细胞表面的marker有太大的变化，marker这群蛋白质的表达需要时间，上机时间短不够这群marker表达的，但细胞的内的信号通路和功能也许就已经发生变化了，不知道这种理论对不对？
另外，抗体也分为激活抗体与阻断抗体，阻断抗体目前认为只是起一个占位作用，不知道流式抗体是不是会专门选择阻断抗体的克隆偶联荧光而制作呢?

stf1990

很有意思的问题，但我觉得应该不会吧，可能跟你选择的抗体有关。

niwanmao

细胞的调控是一个精密的通路，需要培养条件，需要不同受体互相配合，例如CD3的活化，并不是光一个CD3就够了，还需要CD28的辅助。所以不需要过份担心。

zhfansdu

可以在染色之前用0.2%的PFA light Fix一下，这样就不担心激活的问题了

immunology

zhfansdu 发表于 2019-8-29 21:53
可以在染色之前用0.2%的PFA light Fix一下，这样就不担心激活的问题了

不是所有染料都兼容多聚甲醛的，有些用多聚甲醛处理完，染色以后marker会发生变化，有些克隆号的抗体结合的抗原表位就被破坏了，导致结果不准或者没法看。
另外，PFA light是啥意思？light指的是？

stf1990

immunology 发表于 2019-8-30 13:06
不是所有染料都兼容多聚甲醛的，有些用多聚甲醛处理完，染色以后marker会发生变化，有些克隆号的抗体结合 ...

估计是稍微，稍稍固定一下的意思