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标题: 流式细胞术的样本制备和实验设计 [打印本页]

作者: niwanmao 时间: 2015-4-17 11:11
本主题需向作者支付 2 流星 才能浏览

作者: wmingzhen 时间: 2015-4-17 15:52
学习了。谢谢分享。

作者: tianpaopao 时间: 2015-4-20 09:11
视频为什么一直缓冲不出来？

作者: niwanmao 时间: 2015-4-20 10:29

tianpaopao 发表于 2015-4-20 09:11
视频为什么一直缓冲不出来？

我这边电信网络，2秒就出来了。

作者: 向前 时间: 2015-4-30 09:10
您好，倪老师，想请教您一下，甲醇与皂素穿膜两者的区别。还有就是染色体积为什么尽量用小体积？

作者: niwanmao 时间: 2015-4-30 10:50

向前发表于 2015-4-30 09:10
您好，倪老师，想请教您一下，甲醇与皂素穿膜两者的区别。还有就是染色体积为什么尽量用小体积？ ...

甲醇对表面标记影响很大，而皂素则温和。
染色体积尽量小，并非严格要求，小则抗体用量少，节省抗体，你要用大体积也可以关键是抗体的浓度保持一致就行。

作者: 52127172 时间: 2015-9-17 17:29
为什么我点视频没反应？{:soso_e101:}

作者: chainn 时间: 2015-9-21 00:01
老师，视频打不开，不知在其他网站可否看到？或是有其他办法可以看吗？万分感谢！

作者: niwanmao 时间: 2015-9-21 12:25

chainn 发表于 2015-9-21 00:01
老师，视频打不开，不知在其他网站可否看到？或是有其他办法可以看吗？万分感谢！ ...

正常的，貌似跟网络有关，请再试试[attach]8788[/attach]

@chainn @52127172

作者: mcdfish 时间: 2016-1-25 13:50
谢谢老师分享，学习了。

作者: mcdfish 时间: 2016-1-25 13:51
对初学者很有用。

作者: mcdfish 时间: 2016-1-25 13:53
倪老师，想问下，阻断抗体和同型对照的作用是不是有类似的功能？我在考虑要不要加血清阻断抗体。

作者: niwanmao 时间: 2016-1-25 19:41

mcdfish 发表于 2016-1-25 13:53
倪老师，想问下，阻断抗体和同型对照的作用是不是有类似的功能？我在考虑要不要加血清阻断抗体。 ...

不一样。一般我建议在由于Fc片段非特异性结合导致的信号偏高时，才考虑阻断。一般来说，现在大多数单克隆抗体还不错的，除非CD16等特殊抗体。

作者: mcdfish 时间: 2016-1-27 08:27
谢谢老师。就是说染的时候如果阳性很高，就要考虑Fc阻断了对吗？

作者: niwanmao 时间: 2016-1-27 08:39

mcdfish 发表于 2016-1-27 08:27
谢谢老师。就是说染的时候如果阳性很高，就要考虑Fc阻断了对吗？

如果染的时候发生非特异性结合特别明显的时候，就要考虑。

作者: mcdfish 时间: 2016-1-28 09:11

niwanmao 发表于 2016-1-25 19:41
不一样。一般我建议在由于Fc片段非特异性结合导致的信号偏高时，才考虑阻断。一般来说，现在大多数单克隆 ...

想问下倪老师，如果我想区分T细胞中的CD4和CD8，只染CD3和CD4的话是不是就可以了？CD3+CD4-的就是CD8细胞吗？急求

作者: yuanli 时间: 2016-7-15 08:58

niwanmao 发表于 2016-1-25 19:41
不一样。一般我建议在由于Fc片段非特异性结合导致的信号偏高时，才考虑阻断。一般来说，现在大多数单克隆 ...

倪老师：对你说的”除非CD16抗体“，这能细说一些关于CD16抗体么？为什么他是特殊的呢

作者: niwanmao 时间: 2016-7-15 10:46

yuanli 发表于 2016-7-15 08:58
倪老师：对你说的”除非CD16抗体“，这能细说一些关于CD16抗体么？为什么他是特殊的呢 ...

CD16是一种糖基化磷酯酰肌醇锚链的细胞膜蛋白，低亲和力Fcγ受体（FcγRIII）的组成部分。Fc受体基本上与各种抗体都会存在一定的亲和力，所以比较特殊。

作者: 飞翔的烨 时间: 2016-8-9 21:43
花了流星不好看视频

作者: niwanmao 时间: 2016-8-9 21:48

飞翔的烨发表于 2016-8-9 21:43
花了流星不好看视频

可以看的，因为文件大，所以加载时间偏长，或许跟你的浏览器有关。
我用Chrome浏览器，1分钟内开始播放。
[attach]10440[/attach]

作者: xiandaxie 时间: 2016-9-7 22:07
请问这句话是什么意思：“3. 血浆中是否存在干扰性物质。最典型的例子就是标记B细胞表面的免疫球蛋白，由于血浆中的Ig会影响抗体结合，所以需要事先用大体积的缓冲液洗涤至少3次。” 是裂红前要洗三遍，还是裂红后加抗体前，还是其他意思？

作者: niwanmao 时间: 2016-9-8 08:08

xiandaxie 发表于 2016-9-7 22:07
请问这句话是什么意思：“3. 血浆中是否存在干扰性物质。最典型的例子就是标记B细胞表面的免疫球蛋白，由于 ...

在抗体标记之前。

作者: xbaizxyq 时间: 2016-11-16 09:23

niwanmao 发表于 2016-9-8 08:08
在抗体标记之前。

倪老师，如果要标记同时标记血液中的B细胞和T细胞，是先加抗体后裂红还是先裂红再加抗体呢

作者: niwanmao 时间: 2016-11-16 09:46

xbaizxyq 发表于 2016-11-16 09:23
倪老师，如果要标记同时标记血液中的B细胞和T细胞，是先加抗体后裂红还是先裂红再加抗体呢 ...

涉及到轻链和免疫球蛋白的标记，先大体积洗涤三次，然后标记抗体，最后裂解红细胞，去上清。

作者: xbaizxyq 时间: 2016-11-16 11:04

niwanmao 发表于 2016-11-16 09:46
涉及到轻链和免疫球蛋白的标记，先大体积洗涤三次，然后标记抗体，最后裂解红细胞，去上清。 ...

明白了。谢谢倪老师~

作者: sunny2829 时间: 2016-11-23 09:20
谢谢楼主

作者: 丑小鸭小白 时间: 2017-4-18 00:48
看不到视频，老师。

作者: niwanmao 时间: 2017-4-18 08:16

丑小鸭小白发表于 2017-4-18 00:48
看不到视频，老师。

先用2颗流星购买，然后就可以看到底部的视频了。

作者: lgfffancy 时间: 2017-5-23 22:05
需要购买吗

作者: shupian 时间: 2023-11-23 10:59
您好，倪老师，想请教您一下，我们做人肺和肺的引流淋巴结的单细胞，结果做出来是全黑的，太多的碳末和粉尘干扰，上机检测也没有群体，这种样本怎么处理才能完全解决碳末的干扰。

作者: niwanmao 时间: 2023-11-23 13:50

shupian 发表于 2023-11-23 10:59
您好，倪老师，想请教您一下，我们做人肺和肺的引流淋巴结的单细胞，结果做出来是全黑的，太多的碳末和粉尘 ...

我们10年前遇到一个有点类似的山羊葡萄球菌感染的患者样本，可能有点像你所说的情形：
一例九年一遇的奇特标本
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2289-1-1.html
(出处: 流式中文网)

不过，我们当时只是单纯过滤，上机检测没有什么干扰。如果像你这里干扰比较大的话，可考虑Ficoll提取一下看看，可能能够纯化

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