传统的药物敏感性方法可能需要数天或数周与药物之间相互作用，才能确认其敏感性或耐药性。另外，这些方法不能提供那些无法培养的细菌信息。
Charlotte L. Hendon-Dunn等人提出了一种利用流式快速评估结核杆菌药敏结果的方法，原理其实很简单，就是利用Calcein violet-AM（CV-AM）和SYTOX-green（SG）这两种荧光染料，前者可检测酯酶活性，凡是活的细菌均可染色（激发光400nm，发射光452nm），后者可透过破损的菌膜，染核酸，所以是检测细菌死活的一个比较常见的染料（激发光488nm，发射光523nm）。
在加药培养中，每24小时取450ul进行CV-AM/SG双染，即可快速评估整个结核菌群体易感性的信息，而不仅仅是那些可以在培养基中生长的细菌。 因此，该方法可快速得出药物敏感性，并了解抗生素暴露后浓度和时间依赖性药物活性。


下面直接看分析。
首先，在FSC/SSC散点图上选择细菌主要群体：


接着用不染色的细菌，设置第1个门（阴性门）位置：


然后，用对数生长期的细菌，双染CV-AM和SG，设置第2个门（CV-AM单阳性，活细菌）的位置：


再接着，用加热杀死的细菌，双染CV-AM和SG，设置第4个门（SG单阳性，死细菌）的位置：


最后，第2个门和第4个门之间的夹角就是第3个门，第3个门内的双阳性细菌就是被抗生素杀伤的细菌：


对这4个门内细菌比例按照时间绘制曲线变化，可以清晰地看出抗生素对结核菌的杀伤作用，如果出现耐药，也可以快速观察到：


怎么样，简单粗暴吧！用流式，就是如此简单解决问题。

参考文献：
Hendon-Dunn CL, Thomas SR, Taylor SC, Bacon J. A Flow Cytometry Method forAssessing M. tuberculosis Responses to Antibiotics. Methods Mol Biol.2018;1736:51-57. doi: 10.1007/978-1-4939-7638-6_5.