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终于有个标准了 |
倪老师,我想问个问题,我们做出来的阳性结果的阴性峰比阴性对照的峰向右偏移了一部分,是因为什么呢?可以参考如下,是非特异性结合还是偏移的这一部分属于低表达的呢? |
www 发表于 2019-4-9 13:58 1、是单标吗? 2、这个阳性对照是否可靠? |
niwanmao 发表于 2019-4-9 17:30 这个是双标,是PE和BV421,这两个荧光应该没有交叉,主要想得到PE阳性的结果。图中有阳性的这个样品是我们需要检测的样品,不是对照。多次实验都发现阳性的阴性峰比阴性对照偏移一点,而且阳性的结果越大,阴性峰偏移的更大,抗体都是同一浓度配制的。不知道怎么解释这个问题。 |
www 发表于 2019-4-10 13:50 由于不知道你具体的指标和检测的标本类型,所以无法做出准确判断,只能做一些猜测: 如果是在确定细胞密度、抗体用量、染色体积都一致的前提下,出现你这张图里面的结果,那么这些“阴性峰”可以考虑弱表达,因为从图上看,只是阳性比例增高,并不是荧光强度增高,所以阴性峰的右移,可以认为是另一群细胞的表达量在增高,但未达到与阴性峰足够分离 |
niwanmao 发表于 2019-4-11 08:52 所以这个marker的阴性峰应该统一在10^3右边一格位置,而不是10^2右边一格位置? 如果每个样本的阴阳峰的位置都不一样该怎么画门?每个样本做一管自己的阴性管? |
请教下,阳性表达很低的样本这样也不算阳性吗? 另外,最近发现一些问题,同样都是FMO的样本,里面有不同的细胞群的阴性峰位置差很多。之前发现G-MDSC和其他的细胞(例如M-MDSC,B,T等)的CCR2的阴性位置就是不一样,这种情况合理吗?是否需要将G-MDSC的FMO-CCR2单独画门? |
毛豆24821 发表于 2019-12-19 14:53 阴性位置,不是要求你必须在哪个位置,而是你采用正确合适的电压之后,样本内阴性细胞所在的位置,以此为参照,进行如顶楼的判断。 |
请问强阳性的第一种情况,阳性比例画门是按图中虚线处画门吗 |
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