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[细胞周期] 测细胞周期用70%乙醇固定的细节?

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发表于 2019-5-4 08:32:58 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师请教下,翻了论坛很多帖子,发现用PI测细胞周期用70%乙醇固定时有两种互相矛盾的方法。一种是先用30%的PBS或纯水重悬细胞,再将预冷的纯乙醇逐滴加入重悬液;
第二种是将重悬液逐滴加入预冷的乙醇。
请问两种方法哪种比较正确?另外,细胞固定时是否需要放于摩天轮上旋转(4℃过夜)?

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1、建议将细胞悬液滴入70%预冷乙醇比较好。 2、不需要旋转过夜,只需振荡均匀后,放-20度保存。
发表于 2019-5-4 08:32:59 | 显示全部楼层
1、建议将细胞悬液滴入70%预冷乙醇比较好。
2、不需要旋转过夜,只需振荡均匀后,放-20度保存。
 楼主| 发表于 2019-5-5 08:39:14 | 显示全部楼层
自己顶一个
 楼主| 发表于 2019-5-6 09:14:35 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-5-5 15:56
1、建议将细胞悬液滴入70%预冷乙醇比较好。
2、不需要旋转过夜,只需振荡均匀后,放-20度保存。 ...

多谢倪老师。还有个问题,细胞重悬用多少量的PBS重悬好呢,滴到70%乙醇后比例不就变了吗?或者PBS重悬后直接滴入无水乙醇使终浓度为70%,比如300ul的重悬液滴入700ul无水乙醇?
发表于 2019-5-6 16:02:29 | 显示全部楼层
翟天宇沙坪坝 发表于 2019-5-6 09:14
多谢倪老师。还有个问题,细胞重悬用多少量的PBS重悬好呢,滴到70%乙醇后比例不就变了吗?或者 ...

不是那么严格,细胞一般用100~200ul PBS重悬,加入到2ml 70%乙醇,浓度变化不大。
发表于 2019-5-9 19:04:09 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-5-6 16:02
不是那么严格,细胞一般用100~200ul PBS重悬,加入到2ml 70%乙醇,浓度变化不大。 ...

老师,那我们用100uL的PBS重悬之后,逐滴加入300uL的无水乙醇,使终浓度达到75%,这样做会不会对固定有影响?
发表于 2019-5-10 08:55:05 | 显示全部楼层
楚雪菡 发表于 2019-5-9 19:04
老师,那我们用100uL的PBS重悬之后,逐滴加入300uL的无水乙醇,使终浓度达到75%,这样做会不会对固定有影 ...

无水乙醇不好,反而影响结果。
发表于 2019-5-10 11:58:37 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-5-10 08:55
无水乙醇不好,反而影响结果。

为什么不好?老师能详细说说吗?我们现在感觉在流式前处理上出了问题,结果一直不稳定,希望老师能详细说说这个固定的过程,还有就是固定之后必须放到-20度吗?最多能放几天?
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