七种颜色有FITC Tears Red PE APC V450 PE-Cy5.5 PE-Cy7.7 ,如何调补偿

gaarakang

七种颜色有FITC  Tears Red  PE APC  V450 PE-Cy5.5 PE-Cy7.7 ,如何调补偿

niwanmao

首先，可以采用样本或补偿微球进行调，但似乎补偿微球是不是没这么多颜色 @didi_zhou  @haven_t  
其次，可以参考一些荧光光谱查看器的数值，例如BD的spectrum viewer ，见下图，图中表格中会有一些参考的补偿数值：

7色

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-7-19 09:08

                               
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首先，可以采用样本或补偿微球进行调，但似乎补偿微球是不是没这么多颜色 @didi_zhou  @haven_t  
其次，可 ...

老师，我请教一下按照这个BD网站的光谱提示选择Calibur，这四种荧光（FITC PE PerCP APC）的补偿是否是：FL2-FL1 20.4%, FL1-FL2 1.7%， FL3-FL2 11.2%, FL4-FL2 8.5%, FL4-FL3 12.5%, FL2-FL4 0.5%, FL3-FL4 120.2%？  
这个2和4通道之间还存在补偿吗？另外3和4之间的补偿是不是太大了点，到120.2%？

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-7-19 09:54

                               
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老师，我请教一下按照这个BD网站的光谱提示选择Calibur，这四种荧光（FITC PE PerCP APC）的补偿是否是： ...

看来BD这个程序没设计完善啊。

haven_t

niwanmao 发表于 2013-7-19 09:08

                               
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首先，可以采用样本或补偿微球进行调，但似乎补偿微球是不是没这么多颜色 @didi_zhou  @haven_t  
其次，可 ...

comp beads是没有颜色的，捕获抗体后才有颜色。

niwanmao

haven_t 发表于 2013-7-19 11:50

                               
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comp beads是没有颜色的，捕获抗体后才有颜色。

哦。等于就是一种可结合任何抗体的微球？

haven_t

是的，Beads加抗体孵育然后上机，不必担心颜色的问题

didi_zhou

niwanmao 发表于 2013-7-19 09:08

                               
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首先，可以采用样本或补偿微球进行调，但似乎补偿微球是不是没这么多颜色 @didi_zhou  @haven_t  
其次，可 ...

VersaComp 可以自己捕获各种抗体，自己有阴阳性，不用管颜色的。电压大小跟淋巴细胞基本一致。用这种Beads直接加抗体的单染来调整就可以了。

gaarakang

niwanmao 发表于 2013-7-19 09:08

                               
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首先，可以采用样本或补偿微球进行调，但似乎补偿微球是不是没这么多颜色 @didi_zhou  @haven_t  
其次，可 ...

谢谢老师，但是我们机器的滤光片不一样，能否把滤光片的数值调成我们机器的值，然后帮我在调一次补偿，488 激光管
695/40  685LP：Percp-cy5.5
575/26  550LP：PE
780/60  750LP：PE-cy7
610/20  600LP：PE-CF594
530/30  505LP：FITC
640 激光管
670/14       ：APC
405 激光管
450/50  710LP：Horizon V450,
我们机器木有荧光光谱查看器，谢谢老师了，七色补偿太难调了，呵呵

niwanmao

gaarakang 发表于 2013-7-22 09:00

                               
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谢谢老师，但是我们机器的滤光片不一样，能否把滤光片的数值调成我们机器的值，然后帮我在调一次补偿，48 ...

BD、Coulter、eBioscience等公司都有荧光补偿调节的微球，买点试试吧。
每台机器荧光补偿可能都有些不同，用荧光补偿微球是最方便的调节方式。