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端粒是细胞衰老和一些癌症发病过程中起着重要作用。检测端粒平均长度有不少方法，其中Southern blot检测端粒末端限制性片段（TRF）仍是金标准。不过Southern blot的缺点就是耗费的时间和需要提取DNA，而且TRF与实际端粒重复序列起始位置的距离差异较大，故结果可能会有所偏差。Nature 2006年12月份的一篇protocol在flow FISH基础上开发出了端粒平均长度的检测方法，里面不但详细描述了实验步骤（文中检测了22例标本，分2－3天，合计12小时），并且也列出了一些注意点和flow FISH法的缺陷。方法适用于所有的商业化流式细胞仪，希望对做端粒研究的朋友有所帮助。
flow FISH分析示例，标本来自一名83岁正常供者的外周血有核细胞。c图是标本与多肽核酸（PNA）探针杂交，b图为相同标本没有与PNA探针杂交，相当于普通流式中的同型对照或阴性对照。a和d图中，可见细胞还同时染了DNA染料LDS751和各种抗体（CD45RA和CD20），以区分出不同的细胞亚群。g图是牛胸腺细胞、人淋巴细胞、人中性粒细胞、人CD20＋淋巴细胞的端粒长度分析图。
图1
端粒长度的计算方法（每次做需要设置一个牛胸腺细胞和一个已知端粒长度的人类标本作为对照）：
图2
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flowFISH.pdf
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发表于 2013-12-9 19:52:16
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