PMG系列10：细胞内因子检测常见问题解答

niwanmao

这里介绍的是Pharmingen第10个系列：小鼠脾细胞/胸腺细胞BD Phosfl细胞内因子检测常见问题解答

主要涉及的问题有数十个，列出前15个，详见下方5张截图：

• 在进行胞内因子染色时，BD FcBlock试剂有多重要？该如何应用？
• 胞内细胞因子染色时，阻断步骤需要加入的重组细胞因子的量是多少？
• 对于胞内因子染色的优化需要注意哪些？
• 对于大鼠细胞的因子检测，有没有推荐的刺激方法？
• 同时检测胞内因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和FoxP3时，是否有推荐的Buffer？
• 抗小鼠IL-17抗体（clond TC11-18H10）识别A亚型还是F亚型？
• 检测人IL-17A时需要用EL4细胞的哪种ATCC菌株？
• 一步检测IL-17A和Tregs是否有推荐的试剂？
• 是否可一步检测Th1/Th2/Th17分泌细胞？如果可以，有哪些推荐的试剂？
• 如何在体外用人的PBMC得到Th9极化细胞？
• 我想要用BD抗人GATA3抗体与IFN-γ和IL-4共染，推荐的buffer是什么？
• 为什么胞内因子检测与ELISA之间相关性不好？
• BD提供的三种不同的胞内因子检测试剂盒之间主要差异是什么？
• BD Perm/Wash buffer中的沉淀是什么？会对结果产生影响吗？
• 进行BD Cytofix/Cytoperm细胞因子染色步骤时，最佳的终止点是什么？
  

第1页

第2页

第3页

第4页

第5页

钢蛋儿

同时检测胞内因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和FoxP3时，是否有推荐的Buffer？

想问下各位老师，同时检测FoxP3和IL-4为什么尚未成功呢？我设计的实验是用FoxP3 Buffer同时测亚群的，是不是还得重新买IL-4的Buffer了？

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2014-1-11 11:55
同时检测胞内因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和FoxP3时，是否有推荐的Buffer？

想问下各位老师，同时检测FoxP3和 ...

光用foxP3破膜剂应该可以测胞内的。我们平时就用在MPO的检测上。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-1-11 20:46
光用foxP3破膜剂应该可以测胞内的。我们平时就用在MPO的检测上。

谢谢老师，这下我就放心了

晓玮1991

小鼠的PBMC和人血的差别大么？

niwanmao

晓玮1991 发表于 2014-5-28 15:52
小鼠的PBMC和人血的差别大么？

刺激的条件上还是有区别的。

晓玮1991

看文献里讲3.3.2. PBMC (Standard Plates) (see Note 9)
1. Add 20 μL of 20 mM EDTA in PBS to each well, mixing by pipetting.
这个EDTA是什么作用呢？

niwanmao

晓玮1991 发表于 2014-5-29 10:12
看文献里讲3.3.2. PBMC (Standard Plates) (see Note 9)
1. Add 20 μL of 20 mM EDTA in PBS to each well ...

文献全文放上来可能容易看的懂一些。

newbous

老师有做过小鼠IFN-alpha的胞内染吗？我做了一段时间仍然失败，请问老师有什么建议吗？

niwanmao

newbous 发表于 2016-9-26 11:40
老师有做过小鼠IFN-alpha的胞内染吗？我做了一段时间仍然失败，请问老师有什么建议吗？ ...

1、用来刺激的试剂是否有效？刺激是否成功？
2、破膜剂是否有效？
3、胞内染色的抗体是否好？

需要逐步排除。你的结果图形有吗？