加与不加PMA和ionomycin刺激，对检测FoxP3有影响吗？

钢蛋儿

只知道同时在一管细胞里检测的胞内因子IL-17和转录因子FoxP3，需要 PMA和ionomycin刺激4h。然后我就一直以为检测胞内的表达都需要PMA和ionomycin刺激的，今天看文献（见图）才发现只检测转录因子FoxP3表达的话，不需要PMA和ionomycin刺激。可能是我小白了~~~~请问，加与不加PMA和ionomycin刺激，对检测FoxP3有影响吗？

看到的文献是不加PMA和ionomycin刺激呢

niwanmao

Treg分为天然和诱导性的，IL-10可诱导，PMA和离子霉素一般说来可能不会影响，但为了稳妥起见，总还是分开来做不刺激的最好吧。我是这么考虑的。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-3-8 20:06
Treg分为天然和诱导性的，IL-10可诱导，PMA和离子霉素一般说来可能不会影响，但为了稳妥起见，总还是分开来 ...

谢谢倪老师，很有道理～

FacsAriaIII

Treg很难详细定义，自从sagaguchi先生发现一群具有自身免疫性的T细胞可以抑制T细胞的增殖之后，就将其定义为Treg。之后的每一年，他和他的团队都在不停地将Treg的定义不断圈小，从CD4CD25阳性，到Foxp3阳性，后来又到去甲基化，现在仍然还在细化。但是每次重新定义的标准都是这群细分了的细胞是否具有抑制功能。而Treg的抑制功能很大程度上取决于IL-10的分泌。因此，就现有的手段来说，先刺激细胞，然后同时染IL-10和Foxp3更有意义，因为有很大一部分Foxp3的细胞不具有抑制功能。

watson77

PMA和ionomycin的目的是刺激细胞因子分泌，还要加入Golgistop等阻断释放，以蓄积在胞内，便于染色。如果不染胞内细胞因子就不需要加。
如果同时染Foxp3和胞内细胞因子，就需要PMA和ionomycin刺激。个人经验对Foxp3表达影响不大。

钢蛋儿

FacsAriaIII 发表于 2014-3-11 09:25
Treg很难详细定义，自从sagaguchi先生发现一群具有自身免疫性的T细胞可以抑制T细胞的增殖之后，就将其定义 ...

谢谢参与讨论，同时表达IL-10和Foxp3的主要为所谓的I型调节性T细胞。同时染色理论可行，但实际上由于于Foxp3比例本来就低，而Foxp3、IL-10双阳的比例就更低了，导致流式结果数值低、变异大，给统计带来难度。您能否举出相关双染的文献，供大家学习下？谢谢

钢蛋儿

watson77 发表于 2014-3-11 10:28
PMA和ionomycin的目的是刺激细胞因子分泌，还要加入Golgistop等阻断释放，以蓄积在胞内，便于染色。如果不 ...

谢谢，这下我就放心了～～～

FacsAriaIII

钢蛋儿 发表于 2014-3-11 23:59
谢谢参与讨论，同时表达IL-10和Foxp3的主要为所谓的I型调节性T细胞。同时染色理论可行，但实际上由于于Fo ...

其实双不双染看你的目的，如果只是想要说明Treg的相对比例，那么很多文献都把Foxp3阳性的细胞当Treg的，你这么做肯定没问题，当然了，染IL-10是顺便的事儿。

钢蛋儿

FacsAriaIII 发表于 2014-4-10 09:07
其实双不双染看你的目的，如果只是想要说明Treg的相对比例，那么很多文献都把Foxp3阳性的细胞当Treg的， ...

谢谢，最近染CD25一直出问题，如果不染CD25，把CD4+FoxP3+看做Treg可以发表高分杂志吗？

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2014-4-10 21:44
谢谢，最近染CD25一直出问题，如果不染CD25，把CD4+FoxP3+看做Treg可以发表高分杂志吗？ ...

估计够呛。