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[其它] 利用PI单染分析死细胞活细胞的比例

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发表于 2018-5-2 21:37:56 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
第一次用流式细胞仪,想利用PI单染来分析死活细胞的比例,想请教一下大家我做出来的图为什么是下面这样的?怎样区分死细胞活细胞?

QQ20180502-213651@2x.png
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发表于 2018-5-3 08:17:27 | 显示全部楼层
你做的是什么细胞?怎么感觉细胞都死了呢?
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 楼主| 发表于 2018-5-3 10:48:25 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-5-3 08:17
你做的是什么细胞?怎么感觉细胞都死了呢?

第一幅图是L929细胞,第二幅图是B16细胞,但是MTT测的结果大概有50%是活的,我用的没有药物处理的细胞进行电压的调整,这样对吗?
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发表于 2018-5-3 19:26:21 | 显示全部楼层
pxt9098 发表于 2018-5-3 10:48
第一幅图是L929细胞,第二幅图是B16细胞,但是MTT测的结果大概有50%是活的,我用的没有药物处理的细胞进 ...

未经药物处理的细胞跑出来的图形发上来看看。
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 楼主| 发表于 2018-5-4 16:30:21 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-5-3 19:26
未经药物处理的细胞跑出来的图形发上来看看。

这是正常细胞
QQ20180504-162900@2x.png
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发表于 2018-5-4 19:39:48 | 显示全部楼层

正常组和处理组的FSC/SSC电压是否一致?如果一致的话相差也太大了。正常组R1比例多少?
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 楼主| 发表于 2018-5-9 09:38:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-5-4 19:39
正常组和处理组的FSC/SSC电压是否一致?如果一致的话相差也太大了。正常组R1比例多少? ...

之前的实验电压没有一致,我又重复了一遍,想请教一下老师,我应该用正常的细胞做对照来调电压值和增益值?还是用正常细胞进行PI染色后再来调电压值增益值?
1.这是用正常细胞作对照调电压值的结果:
2.正常细胞PI染色后的结果:
为什么正常细胞一半都是死细胞?

正常细胞

正常细胞

正常细胞 + PI

正常细胞 + PI
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发表于 2018-5-9 14:16:21 | 显示全部楼层
pxt9098 发表于 2018-5-9 09:38
之前的实验电压没有一致,我又重复了一遍,想请教一下老师,我应该用正常的细胞做对照来调电压值和增益值 ...

你的PI浓度?染色时间?
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 楼主| 发表于 2018-5-9 17:53:21 | 显示全部楼层
终浓度为5ug/mL,染色1min
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发表于 2018-5-10 07:57:00 | 显示全部楼层
pxt9098 发表于 2018-5-9 17:53
终浓度为5ug/mL,染色1min

那应该是可以的。这个结果是可信的。你得从培养的细胞状态上或收集方法上找问题。
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