查看: 629|回复: 0
收起左侧

[流式protocol] OMIP‐053:鉴定、区分、分选人类主要Treg群体

  [复制链接]
发表于 2019-5-23 11:19:14 | 显示全部楼层 |阅读模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入流式中文网

x
由于缺乏单一的Treg特异性表面标记,人类Treg的鉴定、计数和分选仍然具有挑战性。 Treg谱系标记是核内表达FoxP3,但是这个标记,在活化的人非Treg效应细胞中也会上调,在CD4+分泌细胞因子的非抑制性细胞中也会低水平表达,因此,就给Treg分析和分选更加增加了复杂性。 平时在论坛上,也有不少站友提过分选的事情,foxP3这个核内标记不适合分选,如何选择更好的组合,获得更纯的Treg?这始终是个问题。 纽约医学院的Johannes Nowatzky等人发布了一个Protocol《OMIP‐053: Identification, Classification, and Isolation of Major FoxP3 Expressing Human CD4+ Treg Subsets》,这个单管方案,值得临床检测、临床试验、分选等参考。

方案
20190523_111246.png

分析和分选标记推荐
下图是主要的设门图,这几类Treg圈出来之后,后续分析其HLA-DR、cyKi67、CD39、CCR7、CD45RA等标记的表达,评估其功能和活化情况(详见原文)。
20190523_110236.png
这里需要说明一下的是以下几点: TDP指的是Treg的定义标记 TDP-1 = CD127lo/CD25hi/FoxP3pos TDP-2 = CD45RApos/FoxP3low” “resting Treg” (rTreg) 和FoxP3high/CD45RAneg “activated” Treg (aTreg) TDP-3 = FoxP3pos/HELIOSpos, presumably thymic Treg SE指的是对应的表面标记群体,是为了方便检测,不破膜,仅使用表面标记圈出对应的TDP亚群。 TDP-1约等于SE-1 TDP-2约等于SE-2 TDP-3约等于SE-3 最后文中强调了一点,做Treg分选的同学注意一下,作者建议,Treg细胞用CD3+CD4+CD25+CD127low圈出来之后,并不纯粹,若能进一步排除掉CD226+TIGIT-的细胞,后续的Treg体外培养会更纯更好。

这个方案,有没有解答你一些困惑呢?

本帖被以下淘专辑推荐:

您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2019-9-23 23:12

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.