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[其它] 利用流式细胞术做抗原亲和力

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发表于 2019-8-8 08:33:32 | 显示全部楼层 |阅读模式
10流星
想请问看看有没有知道怎么利用FCM来检测细胞表面另外表达的抗体与对应抗原的结合力
现在想到的是先利用抗原A-PE 不同浓度 找到染色MFI上限

在另外一组中用抗原A/抗原A-PE的不同比例 再做一次  (这应该在哪个浓度合适?  1/2 的最大MFI ?)

但之后怎么进行计算呢??




发表于 2019-8-8 14:08:44 | 显示全部楼层
你这样好像计算不出来吧,看看这篇文章Cell-Binding Assays for Determining the Affinity of Protein–Protein Interactions:Technologies and Considerations介绍
发表于 2019-8-8 14:10:37 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2019-8-8 14:08
你这样好像计算不出来吧,看看这篇文章Cell-Binding Assays for Determining the Affinity of Protein–Pro ...

如果你细胞上抗体是低表达的,可以计算出EC50,特定条件下也可以按这个进行换算,限制条件比较多的

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 楼主| 发表于 2019-8-9 10:04:27 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2019-8-8 14:10
如果你细胞上抗体是低表达的,可以计算出EC50,特定条件下也可以按这个进行换算,限制条件比较多的 ...

您介绍的文献帮助很大
对于里头有张图想请问一下
表二中在做浓度测定的时候 怎么平衡体积在后面就不停增高了呢
我以为是固定体积 浓度一直稀释下去
不知道关于这点您怎么看
发表于 2019-8-12 08:35:08 | 显示全部楼层
hejinyuan 发表于 2019-8-9 10:04
您介绍的文献帮助很大
对于里头有张图想请问一下
表二中在做浓度测定的时候 怎么平衡体积在后面就不停增 ...

文献是这么写的,也不太明白它的意义,我在实际稀释过程中都是固定体积进行梯度稀释,这篇文章我主要看了前面介绍的检测原理,后面是实例及这种方法中的影响因素
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2019-8-12 08:35
文献是这么写的,也不太明白它的意义,我在实际稀释过程中都是固定体积进行梯度稀释,这篇文章我主要看了 ...

我做了一次实验 可以得到阳性率随著降低 MFI值也是  做图的时候 用哪个好呢?
文章内写的是ratio 您会建议用MFI 还是阳性细胞比率 或者是一个相乘的总值呢
发表于 6 天前 | 显示全部楼层
我用的是定量测细胞表面抗原的Beads,通过公式8来计算亲和力的
 楼主| 发表于 5 天前 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2019-8-14 08:01
我用的是定量测细胞表面抗原的Beads,通过公式8来计算亲和力的

怎样的一个定量的bead?
我看文献上说明 我直接在graph-pad里头用non-linear regression 去fit数据
发表于 5 天前 | 显示全部楼层
hejinyuan 发表于 2019-8-15 14:41
怎样的一个定量的bead?
我看文献上说明 我直接在graph-pad里头用non-linear regression 去fit数据 ...

我用的是bangslabs的Quantum™ FITC-5 MESF的定量Beads,进行计算拟合,graph-pad也有方程可以拟合,没用过,不知道这两种计算方法哪种拟合出的数据更好
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