流式能够检测细胞的DNA含量发生变化？

liuyongqiang

大家好，请问流式能够检测细胞DNA含量变化吗？如果有对照的话，看相对荧光强度可以吗？还有就是使用倍性分析的话能不能看峰图的移动来确定DNA含量的变化？求大神支招！万谢！@niwanmao

hwthwt

用PI或7-AAD等核酸染料就可以了。参照细胞周期的染色，论坛里有很多教程

sunzheng_99

正常人静止体细胞有46条染色体，相当于7.10-12 pg DNA/细胞核，我们称之为二倍体细胞，而正常增殖细胞则存在不同的DNA含量。在细胞周期（G0，G1，S，G2 ，M）的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化：在G1期，细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体；进入S期后，DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1和G2期之间；当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期，G2期细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期，因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期；一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个子细胞，这两个子细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1，S，G2/M期。
通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M/%，了解细胞的增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。正常细胞具有较恒定的DNA含量，而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异常是很常见的。这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来，这一指数对于肿瘤的早期诊断，交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅助指标。
应该注意的是，只有在染色体数目的变化带来的DNA含量差异可被检测时，才可能有DNA异倍体的检出。因此DNA含量的不异常不能除外恶性或染色体异常的存在。另外，正常细胞在衰老过程中的多倍体化以及肿瘤治疗后导致的DNA含量的增加、凋亡和坏死导致的DNA含量降低都是在分析DNA直方图时需要考虑的因素。

liuyongqiang

sunzheng_99 发表于 2019-8-16 08:23
正常人静止体细胞有46条染色体，相当于7.10-12 pg DNA/细胞核，我们称之为二倍体细胞，而正常增殖细胞则存 ...

谢谢您的解答，感觉明白了许多。还是有很多疑问，如果您知道麻烦解答一下。我的四膜虫细胞是说45倍体，有121条染色体，由于某个基因敲掉怀疑其DNA含量发生变化，由于倍性这么大，DNA含量如果发生微弱的变化应该看不出来对吗？您说的分析DNA直方图怎么做呢？

niwanmao

liuyongqiang 发表于 2019-8-16 14:46
谢谢您的解答，感觉明白了许多。还是有很多疑问，如果您知道麻烦解答一下。我的四膜虫细胞是说45倍体，有 ...

如果你需要测DNA含量，这个方法在植物学上是做的比较多的。
可以采用几种已知DNA含量的细胞，进行核酸染色，做出标准曲线，然后再测未知含量的细胞，通过其荧光值反推DNA含量。
也可以直接拿已知DNA含量的细胞作为内参，与待测样本混合，根据DNA含量对比，计算出含量变化。



但是如果只是基因敲除的话，是测不出DNA含量变化的。只有染色体数量发生明显变化的时候才行。

liuyongqiang

niwanmao 发表于 2019-8-16 19:21
如果你需要测DNA含量，这个方法在植物学上是做的比较多的。
可以采用几种已知DNA含量的细胞，进行核酸染 ...

谢谢老师，感觉收获很大！