用Annexin V-APC/7-AAD检测凋亡细胞挤在一堆分群很差

hwthwt

如题，使用Beckman Cytoflex仪器，APC和7-AAD2种染料检测凋亡。APC的检测带通为660/20，7-AAD的检测带通为690/50。488nm激光延迟为0，638nm激光延迟为-36ms。单染管补偿调好之后上实验管细胞就挤在一堆分不开。按理说APC和7-AAD是由2种不同波长的激光激发，他们应该分的很开不是么？为什么会变成图中的样子？百思不得其解，恳请各位高手指导！

niwanmao

单染和双染都是同一管实验管吗？

hwthwt

niwanmao 发表于 2019-9-29 21:29
单染和双染都是同一管实验管吗？

倪老师好，我没明白您的意思。
我的单染和双染都是同一种细胞。区别是单染管是用阳性药处理的，双染管是用我感兴趣的药物处理的。
这种用APC/7-AAD细胞挤在一堆的情况不止出现在一个人的实验上，不同的人，不同的细胞，不同的药物处理，但结果都是这样细胞挤在一堆分不开。所以我怀疑是不是机器本身的原因？还是有什么参数我没调好？另外同样的细胞，同样的药物，我用FITC/7-AAD就分的很漂亮。

小白来也

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niwanmao

hwthwt 发表于 2019-9-30 07:44
倪老师好，我没明白您的意思。
我的单染和双染都是同一种细胞。区别是单染管是用阳性药处理的，双染管是 ...

我前面打字可能没写得很准确，意思是单染和双染是否为同样的细胞。
现在从你描述来看，单染和双染不是同一种药物处理的，所以我在想，你做双染的细胞，分一点出来做单染看看，是不是也是分群不清？我觉得应该也一样，不可能单染好双染不好。
至于FITC和7-AAD分群好，那么就说明你用的药物对APC会有影响可能。

苏沁沁

niwanmao 发表于 2019-11-10 16:34
我前面打字可能没写得很准确，意思是单染和双染是否为同样的细胞。
现在从你描述来看，单染和双染不是同 ...

请问倪老师、什么叫药物对APC有影响？药物会影响荧光吗？

niwanmao

苏沁沁 发表于 2019-11-11 09:35
请问倪老师、什么叫药物对APC有影响？药物会影响荧光吗？

有些药物会发出荧光，恰好与你检测的荧光素通道相近，于是就造成干扰。

tiger

从楼主的几个流式图可以看出，单染7-AAD管，坏死细胞50%，单染APC管，凋亡细胞40%多，双染管大部分为双阳性是对的。

苏沁沁

niwanmao 发表于 2019-11-11 13:44
有些药物会发出荧光，恰好与你检测的荧光素通道相近，于是就造成干扰。 ...

好的、学习了、谢谢您