单核细胞亚群是否Fc blocking问题

南瓜妹妹

老师，您好!我想请教一下，做人单核细胞CD14和CD16分群需要Fc blocking 吗？如果因为CD16不能Fc blocking，那么后面进一步进行细胞表面其他蛋白染色，可能会存在同型染色高于抗体荧光的情况，该如何画门呢？FMO应该也是要Fc封闭的，如果不能进行封闭，如何减少非特异性染色呢？谢谢！

特勒兮兮

我们的单核和中性粒的非特异性结合是好像比较高

飞翔

单核和中性粒的非特异性结合是比较高，想去除非特异结合的影响，就是Fc blocking封闭，还有不带Fc端的抗体，也可以去除这类影响。人单核细胞CD14和CD16分群，你就不能封闭了，可以试试不带Fc端的抗体。
或者还有其他方法或方式，就不太了解了

雅世倩仔

请问你是将PBMC进一步磁珠分选然后得到的单核细胞吗？阴选还是阳选？阳性细胞比例怎么样？

niwanmao

CD14和CD16的染色，不需要封闭啊，分群很好的。

南瓜妹妹

好的，谢谢倪老师！还有一个问题想请教您，这种分群很好的还需要做同型吗？一般冻存后的PBMC复苏做流式需要染死活，那新鲜全血分离PBMC后当天做流式需要染死活吗？新鲜全血裂红后做流式需要染死活吗？谢谢！

南瓜妹妹

飞翔 发表于 2019-10-14 16:57
单核和中性粒的非特异性结合是比较高，想去除非特异结合的影响，就是Fc blocking封闭，还有不带Fc端的抗体 ...

我也试过封闭和不封闭，好像区别不是很大，就是想确认一下可不可以不封闭

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2019-10-14 22:58
CD14和CD16的染色，不需要封闭啊，分群很好的。

好的，谢谢倪老师！还有一个问题想请教您，这种分群很好的还需要做同型吗？一般冻存后的PBMC复苏做流式需要染死活，那新鲜全血分离PBMC后当天做流式需要染死活吗？新鲜全血裂红后做流式需要染死活吗？谢谢！

飞翔

南瓜妹妹 发表于 2019-10-15 09:06
我也试过封闭和不封闭，好像区别不是很大，就是想确认一下可不可以不封闭 ...

区别不大，就没关系吧，是不是加的抗体不管是非特异的或特异的，都是结合在CD14和CD16上，它对分群的结果没有影响，所以封闭和不封闭差别不大，可能是这么个原因。其它类的实验，如果严禁的话就需要封闭。

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2019-10-15 09:06
好的，谢谢倪老师！还有一个问题想请教您，这种分群很好的还需要做同型吗？一般冻存后的PBMC复苏做流式需 ...

不需要同型。
死活的区分，建议无论什么情况，都尽可能做上去，因为你不知道标本在放到你手上之前，发生了什么。