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[淋巴细胞相关] CFSE标记T淋巴细胞与7-AAD共染,7-AAD也将CFSE标记的T细胞染上了

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发表于 2019-10-17 13:21:58 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
最近在做MLR实验,方案如下,CFSE标记T cell,然后与Stimultor cell共培养,FACS检测时发现,7AAD不仅可以标记死细胞,而且也会标记上CFSE标记的T cell,这样就无法判断CFSE-T cell的比例。网上有卖CFSE/7-AAD细胞增殖试剂盒的,请问流式细胞仪如何检测?CFSE:DOJINDO  488-530
7-AAD:Biolengd  488-675
流式细胞仪:艾森

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2019-10-18 08:09:34 | 显示全部楼层
1、7-AAD染上,说明细胞真死了,因为CFSE浓度过高,是可以发生较大量的细胞死亡。
2、图片上传,如果发帖的时候,工具栏图片按钮可以直接上传,如果回复的话,需要点击右上“高级模式”切换到完整的编辑器窗口才能上传。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-11-28 17:25:44 | 显示全部楼层
您好,我也有同样的问题,细胞是CD34+细胞。但我的7-AAD和Annexin V 双阳的很少。这是第一天染完CFSE就跑的流式
这已经是补偿以后的图片, 谢谢您@niwanmao
CSFE,Annexin V.png
AnnexinV,7-AAD.png
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发表于 2021-11-28 17:33:55 | 显示全部楼层
hjj 发表于 2021-11-28 17:25
您好,我也有同样的问题,细胞是CD34+细胞。但我的7-AAD和Annexin V 双阳的很少。这是第一天染完CFSE就跑的 ...

忘记上传一个图了
7-AAD, CFSE.jpg
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发表于 2021-11-29 08:58:00 | 显示全部楼层
hjj 发表于 2021-11-28 17:33
忘记上传一个图了

7-AAD和CFSE存在难调的补偿,所以可以在此图上选择左上角那群真正7-AAD阳性的细胞,再去圈Annexin V阳性的。
总体看起来,双阳的应该是很少的。
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发表于 2021-11-29 15:10:46 | 显示全部楼层
谢谢老师的解答, 已按照您的建议看了。但这样表明我无法用这个共染的方案?您觉得AnnexinV-FITC, PI, ef760,这个方案如何, 非常感谢老师。
CFSE.png
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-11-29 21:40:07 | 显示全部楼层
hjj 发表于 2021-11-29 15:10
谢谢老师的解答, 已按照您的建议看了。但这样表明我无法用这个共染的方案?您觉得AnnexinV-FITC, PI, ef76 ...

主要是CFSE和7-AAD的补偿难以谈到横平竖直的状态。也不叫不能用。
你不是要用CFSE吗?改成AnnexinV-FITC, PI, ef760,准备用哪个监测增殖?
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发表于 2021-12-2 16:56:15 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-11-29 21:40
主要是CFSE和7-AAD的补偿难以谈到横平竖直的状态。也不叫不能用。
你不是要用CFSE吗?改成AnnexinV-FITC,  ...

谢谢老师的回复。
另一个方案就不用CFSE,用EF670看增殖
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发表于 2021-12-2 17:54:19 | 显示全部楼层
hjj 发表于 2021-12-2 16:56
谢谢老师的回复。
另一个方案就不用CFSE,用EF670看增殖

明白了,是 Cell Proliferation Dye eFluor™ 670,只要补偿好调就OK
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发表于 2022-2-7 16:31:19 | 显示全部楼层
谢谢老师
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