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标题: 第一次做CFSE增殖检测，想请倪老师帮忙看下数据，非常感... [打印本页]

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-10 15:48
标题: 第一次做CFSE增殖检测，想请倪老师帮忙看下数据，非常感...
本帖最后由六轮花开于 2012-12-12 16:28 编辑

麻烦倪老师帮忙看看这6个实验管的情况，测的时候初看只有6和8有双峰，但是我不确定是不是分代峰，因为只有这两管里包含两种细胞，APC和脾淋巴细胞，可是只有脾淋巴细胞是染了CFSE的呀，请问倪老师这两管是增殖了吗？如果是，增殖有差异吗？第一次做，还没学会软件使用，但是很想知道这次结果怎么样，谢谢老师！

12-12号
1-空白管
2-CD25-PE 单染
3-Foxp3-PE-Cy5 单染
4-IgG-PE-Cy5 同型对照
5-CFSE 单染
6-10管为实验管。都染了CFSE,CD25 和Foxp3

CD25好像染的不太好。我很想知道这次细胞增殖的数据是不是可用。另外看CD25+Foxp3+和CD25-Foxp3-两群细胞分别的增殖情况怎样。麻烦倪老师了！！非常感谢！！

作者: niwanmao 时间: 2012-12-10 15:48
顺序倒还好的，三个压缩包解压到一个目录下，就排列好了。
但是很奇怪，3难道没有染CFSE吗？为什么一点荧光都没有。
其它几管如果按照2作为父代，还是可以拟合出来的，但是不明显。

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-10 21:09

niwanmao 发表于 2012-12-10 20:47

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顺序倒还好的，三个压缩包解压到一个目录下，就排列好了。
但是很奇怪，3难道没有染CFSE吗？为什么一点荧光 ...

哦哦是的，第3管只有没染CFSE的APC细胞，是阴性对照。倪老师觉得增殖不明显是不是因为培养时间不够长？这是染CFSE后培养3天测的，同一批处理的细胞还有复孔，我打算培养第5天的时候再去测，到时候再看看数据怎么样？谢谢倪老师~

作者: niwanmao 时间: 2012-12-10 21:18

六轮花开发表于 2012-12-10 21:09

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哦哦是的，第3管只有没染CFSE的APC细胞，是阴性对照。倪老师觉得增殖不明显是不是因为培养时间不够长？这 ...

这个条件很难说，多数情况下都很难做到象说明书上那么典型的，不知道你这个幻灯片看过没有？
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1969-1-1.html
里面讲得非常详细，可以参考和琢磨一下

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-12 16:18

niwanmao 发表于 2012-12-10 15:48

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顺序倒还好的，三个压缩包解压到一个目录下，就排列好了。
但是很奇怪，3难道没有染CFSE吗？为什么一点荧光 ...

倪老师，我今天又把培养5天的细胞测了流式，这次上机前另外又染了CD25和Foxp3.希望倪老师能帮我看一下这次的增殖明显吗，数据可用吗？非常感谢！这里不能传附件，我放在楼顶了~

作者: niwanmao 时间: 2012-12-12 17:38

六轮花开发表于 2012-12-12 16:18:52

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[quote]niwanmao 发表于 2012-12-10 15:48 [url=forum.php?mod=redirect&g

你可能用的是快捷回复的窗口，要上传附件，需要点击窗口右上的“高级模式”，进入高级编辑窗口，就可以了。

数据现在暂时没办法看，等会儿回去再帮你分析看看。

作者: niwanmao 时间: 2012-12-12 22:35

六轮花开发表于 2012-12-12 16:18

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倪老师，我今天又把培养5天的细胞测了流式，这次上机前另外又染了CD25和Foxp3.希望倪老师能帮我看一下这 ...

以第10管为例，可以看到，绝大多数都是CD25－FOXP3－的细胞：
CD25-foxP3-的增殖
[attach]2393[/attach]

而CD25＋foxP3-的细胞很少，见下面CD25＋foxP3-的增殖图，这样就造成模型在拟合上准确性不佳。至于CD25＋foxP3＋这群双阳性的Treg更是几乎看不到了。
[attach]2394[/attach]

我个人建议的解决方法是：
如果你的目的就是分析CD25+的细胞，那么建议在获取时，可以只获取CD25＋那群细胞，并使其细胞总数尽可能达到2－3万以上。

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-13 09:47

niwanmao 发表于 2012-12-12 22:35

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以第10管为例，可以看到，绝大多数都是CD25－FOXP3－的细胞：
CD25-foxP3-的增殖

我昨天染的CD25不太好，没怎么染上。用的ebioscience的 Treg细胞试剂盒，原来这个试剂盒染的一直不错的。今天再重新染一下看看。真是麻烦您了，非常非常感谢！另外，我昨天的数据如果不分细胞群，单看脾淋巴细胞的增殖的话，增殖明显吗？第8管和第10管有差异吗？谢谢您！

作者: niwanmao 时间: 2012-12-13 14:31

六轮花开发表于 2012-12-13 09:47

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我昨天染的CD25不太好，没怎么染上。用的ebioscience的 Treg细胞试剂盒，原来这个试剂盒染的一直不错的。 ...

晚上回去看看，现在用的是公用电脑。

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-13 15:35
这是今天染了测的，跟昨天的10管对应的完全一样。最后的一批复孔了，测的时候获的细胞比较多，不知道跟昨天相比结果有没有好一点。麻烦倪老师了！真的非常感谢！

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-13 15:36

niwanmao 发表于 2012-12-13 14:31

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晚上回去看看，现在用的是公用电脑。

麻烦您帮我把今天测的也一起看看好吗。还是看看总体脾淋巴细胞的增殖情况和分别的两群细胞的情况。非常非常感谢。

数据放在了楼上

作者: niwanmao 时间: 2012-12-13 21:36

六轮花开发表于 2012-12-13 09:47

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我昨天染的CD25不太好，没怎么染上。用的ebioscience的 Treg细胞试剂盒，原来这个试剂盒染的一直不错的。 ...

第8管的结果就是这样，第10管见前面的帖子，是否有区分请结合你的实验进行判断。
[attach]2424[/attach]

作者: niwanmao 时间: 2012-12-13 21:46

六轮花开发表于 2012-12-13 15:35

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这是今天染了测的，跟昨天的10管对应的完全一样。最后的一批复孔了，测的时候获的细胞比较多，不知道跟昨天 ...

你可能主要是要看8号和10号，所以就给你分析这两个，我觉得还是只能看全部的细胞，因为CD25＋的和foxP3阳性的细胞太少了。：
8号双阴性
[attach]2425[/attach]

8号CD25＋foxP3-
[attach]2426[/attach]

10号双阴性
[attach]2427[/attach]

10号CD25＋foxP3-
[attach]2428[/attach]

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-14 09:24
谢谢倪老师！辛苦您了！我确实主要想看8和10有没有差异。如果不分细胞，就看总体的，这两管有显著差异吗？哪管增殖更明显呢？很惭愧，我不大会看这个数据。。。
不知道为什么染色不太好，不知道是不是因为这次细胞量太大，用的抗体量相对来说有点少了。

作者: niwanmao 时间: 2012-12-14 12:33

六轮花开发表于 2012-12-14 09:24

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谢谢倪老师！辛苦您了！我确实主要想看8和10有没有差异。如果不分细胞，就看总体的，这两管有显著差异吗？ ...

就是看图上那些数字，我帮你整理一下双阴性细胞的增殖情况，从数据上看，10号增殖相对明显些。
                     8号（%）                         10号（%）
parent          36.19                               29.74
2代                0.19                                  5.13
3代                0.00                                  0.00
4代                53.72                               44.98
5代                9.90                                  20.15

但是CD25+的细胞数量太少，虽然你也可以按照这样的方式比较，但可能意义不大。
其实CD25+的细胞少并不是你染色没染好的缘故，而是这种细胞本来就少，没有办法的。

作者: 六轮花开 时间: 2012-12-18 12:29

niwanmao 发表于 2012-12-14 12:33

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就是看图上那些数字，我帮你整理一下双阴性细胞的增殖情况，从数据上看，10号增殖相对明显些。
...

好的。谢谢您！

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