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标题: BD淋巴细胞亚群检测试剂盒－提升效率至新高度 [打印本页]

作者: flowcyto 时间: 2013-8-1 08:25
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作者: joushua.L 时间: 2013-8-2 11:21
为什么beckman检测NK细胞的试剂中没有CD16？这样对结果有影响吗@didi_zhou

作者: Lillian 时间: 2013-8-2 14:57

joushua.L 发表于 2013-8-2 11:21

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为什么beckman检测NK细胞的试剂中没有CD16？这样对结果有影响吗@didi_zhou

这样对结果是有影响的。CD56单一标记并不能检测出所有NK细胞，需和CD16共同使用才能保证100%的NK细胞的检出。

作者: didi_zhou 时间: 2013-8-2 15:21

joushua.L 发表于 2013-8-2 11:21

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为什么beckman检测NK细胞的试剂中没有CD16？这样对结果有影响吗@didi_zhou

理论上CD56 表达于所有NK及NKT细胞中，而CD16只表达于成熟的NK细胞中（详情可以查阅本网站的“CD分子”栏目）。理论上CD56的表达可以包括CD16的表达，所以检测CD56+与CD16+/CD56+的效果应该一样。所以全球以及SFDA、以及国家卫生行业标准里面吧NK细胞的检测标准定为CD3-CD56+或CD3-CD(16+56+)，不然贝克曼的试剂也不会有SFDA证及DVI证了嘛。

标准号：WS/T 3602011

http://www.moh.gov.cn/zwgkzt/s9492/wsbz.shtml

当然，理论和现实还是有一定差距的，CD56+和CD16+CD56+肯定是有一定差距的，就像上面BD的同行说的。单加CD56不能完全检出NK细胞，那么这个差异是多少呢？CD45+CD3-CD56+的细胞占总淋巴细胞的0.1%-0.3%左右（见附图），所以这个误差是完全被行业标准所接受的（不然也不会进标准了嘛

）。

另外使用CD56+和某些公司使用CD56+CD16+还有另外一个原因，具体我就不说了，以免有争议，大家看图理解（加一起帮助也不是很大）。

作者: didi_zhou 时间: 2013-8-2 15:23

Lillian 发表于 2013-8-2 14:57

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这样对结果是有影响的。CD56单一标记并不能检测出所有NK细胞，需和CD16共同使用才能保证100%的NK细胞的检 ...

这个回答满意不？lilin同学？

作者: niwanmao 时间: 2013-8-2 16:28

didi_zhou 发表于 2013-8-2 15:21

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理论上CD56 表达于所有NK及NKT细胞中，而CD16只表达于成熟的NK细胞中（详情可以查阅本网站的“CD分子”栏 ...

@didi_zhou 出示的数据没错，CD56－CD16＋的NK细胞确实很低，因此，如果对于一些不需要非常细化的研究或临床测试，CD16可以不加，但是如果对于一些需要对NK细胞深入探讨的免疫学研究，CD16是一定要加上的，因为CD16的表达增强与NK细胞的细胞毒相关。

PS：@didi_zhou 帖子中有个笔误，仔细看看。

NK相关资料：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2425-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2411-1-1.html

作者: didi_zhou 时间: 2013-8-2 16:34

niwanmao 发表于 2013-8-2 16:28

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@didi_zhou 出示的数据没错，CD56－CD16＋的NK细胞确实很低，因此，如果对于一些不需要非常细化的研究或 ...

嗯倪老师说的没错，我们的讨论针对的是临床监测试剂盒。如果是其他研究，比如您说的细胞毒性检测，更应该将16与56分开加，而不是混在一起，您认为呢？

作者: Flower 时间: 2013-8-2 16:38

didi_zhou 发表于 2013-8-2 16:34

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嗯倪老师说的没错，我们的讨论针对的是临床监测试剂盒。如果是其他研究，比如您说的细胞毒性检测，更应该 ...

确实如此，如果要细化，用混在一起用同一种荧光素标记就没有意义了

作者: Flower 时间: 2013-8-2 16:39

niwanmao 发表于 2013-8-2 16:28

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@didi_zhou 出示的数据没错，CD56－CD16＋的NK细胞确实很低，因此，如果对于一些不需要非常细化的研究或 ...

是IVD么？

作者: niwanmao 时间: 2013-8-2 16:44

didi_zhou 发表于 2013-8-2 16:34

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嗯倪老师说的没错，我们的讨论针对的是临床监测试剂盒。如果是其他研究，比如您说的细胞毒性检测，更应该 ...

说起来还有一个地方也需要分开来，就是白血病和淋巴瘤的免疫分型，必须分开，案例见：外周t细胞淋巴瘤还是NK细胞淋巴瘤？

作者: haven_t 时间: 2013-8-12 08:44

Lillian 发表于 2013-8-2 14:57

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这样对结果是有影响的。CD56单一标记并不能检测出所有NK细胞，需和CD16共同使用才能保证100%的NK细胞的检 ...

这个试剂盒粒细胞的CD16克隆号是B73.1的，为什么粒细胞群体没有表达呢？

作者: niwanmao 时间: 2013-8-12 13:33

haven_t 发表于 2013-8-12 08:44

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这个试剂盒粒细胞的CD16克隆号是B73.1的，为什么粒细胞群体没有表达呢？

会不会患者存在免疫缺陷？http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20664961

作者: haven_t 时间: 2013-8-12 14:46

niwanmao 发表于 2013-8-12 13:33

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会不会患者存在免疫缺陷？http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20664961

我所做的标本都是这样，不是个别事件

作者: niwanmao 时间: 2013-8-12 14:56

haven_t 发表于 2013-8-12 14:46

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我所做的标本都是这样，不是个别事件

正常人会有部分人由于FcγRIIIB的变异而表达缺失，但如果做了大量正常人标本全都这样就不应该了。跟技术支持联系一下。

作者: haven_t 时间: 2013-8-12 15:07

niwanmao 发表于 2013-8-12 14:56

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正常人会有部分人由于FcγRIIIB的变异而表达缺失，但如果做了大量正常人标本全都这样就不应该了。跟技术支 ...

其实也不知道算不算是问题，反正做出来淋巴细胞的结果没有问题，只是觉得有点奇怪而已。

作者: haven_t 时间: 2013-8-12 15:23

niwanmao 发表于 2013-8-12 14:56

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正常人会有部分人由于FcγRIIIB的变异而表达缺失，但如果做了大量正常人标本全都这样就不应该了。跟技术支 ...

但我做这么多免疫分形还没见过成熟粒细胞CD16缺失的。

作者: gcz5340 时间: 2013-8-12 15:24

haven_t 发表于 2013-8-12 08:44

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这个试剂盒粒细胞的CD16克隆号是B73.1的，为什么粒细胞群体没有表达呢？

什么意思，粒细胞应该CD16阳性？结果你做的粒细胞没有阳性？麻烦科普一下

。

作者: haven_t 时间: 2013-8-12 15:32

gcz5340 发表于 2013-8-12 15:24

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什么意思，粒细胞应该CD16阳性？结果你做的粒细胞没有阳性？麻烦科普一下。 ...

以下是引用CD分子库关于CD16的描述

结构与功能：一种糖基化磷酯酰肌醇锚链的细胞膜蛋白，低亲和力Fcγ受体（FcγRIII）的组成部分。包括CD16a和CD16b两种亚型，结构上略有差异。FcγRIII的多态性与利妥昔（CD20单抗）治疗的效果具有相关性。

正常表达：NK细胞（只表达在成熟NK细胞，NK前体和幼稚NK细胞不表达）；一些T淋巴细胞；中性粒细胞和巨噬细胞（嗜酸粒细胞或破骨细胞除外）；

异常表达：部分急性髓细胞白血病，对M4和M5的诊断有较好的特异性，但敏感性不高；部分NK细胞肿瘤，尤其是侵袭性NK细胞白血病/淋巴瘤和一些鼻型NK细胞白血病淋巴瘤，但是原始NK细胞淋巴瘤不表达。

所以CD16应该在成熟粒细胞上表达，以前用BC的CD16+56/CD3 做粒细胞上有表达，但是这个TBNK的试剂盒粒细群体CD16是阴性的，所以觉得奇怪。

作者: gcz5340 时间: 2013-8-12 15:39
学习了，看来这个kit只适合做淋巴细胞。

另外，常听你们临床说不同克隆号，是不是临床检测都有标准克隆号。还有好多公司克隆号都一样，难道说他们抗体都是一家公司生产的，然后不同的公司买来标记不同荧光素？@niwanmao

作者: niwanmao 时间: 2013-8-12 15:42

gcz5340 发表于 2013-8-12 15:39

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学习了，看来这个kit只适合做淋巴细胞。

另外，常听你们临床说不同克隆号，是不是临床检测都有标准克隆号 ...

是的。某个科研机构打出了一株抗体，就可以命名一个克隆号，然后卖给不同公司，标上荧光素，就以该公司的产品出售了。
所以，平时挑选抗体，就依照克隆号，而不是荧光标记。当然，同一克隆号，不同公司出产的话其滴度可能也有所不同，所以还需要验证其效价。：）

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