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标题: 大鼠的免疫表型分析问题 [打印本页]

作者: zark_00 时间: 2014-6-6 09:43
标题: 大鼠的免疫表型分析问题
本帖最后由 zark_00 于 2014-6-6 11:16 编辑

请问各位，做大鼠外周血或脾细胞的免疫表型，只做到 pan-T， T-helper，T-toxic ，B ，NK的话

6色染足够了吧，我选择如下 CD45(对大鼠需要么),pan-T CD3， T-helper CD4，T-toxic CD8a，B CD45RA，NK CD161a?
做过大量的灵长类和小鼠的，没做过大鼠的

作者: niwanmao 时间: 2014-6-6 19:55
这篇文献应该比较适合你吧：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9086287

作者: zark_00 时间: 2014-6-6 22:39
非常感谢啊，我也用immunophenotyping rat 关键词搜，怎么搜不到？

作者: zark_00 时间: 2014-6-6 23:00
还有，不知道NK是不是CD161a啊

作者: niwanmao 时间: 2014-6-7 08:32

zark_00 发表于 2014-6-6 23:00
还有，不知道NK是不是CD161a啊

可以的。大多文献都是用这个

作者: zark_00 时间: 2014-6-7 18:56
本帖最后由 zark_00 于 2014-6-7 19:06 编辑

谢谢。再请教个问题，PE-CY7和APC-Cy7能一起用么，会有严重干扰无法做补偿么？我在biolegend上查了吸收峰，几乎重合，而且在Aria 上，PE-CY7和APC-Cy7 共用一个倍增管，一个LP，一个BP好像。

我按上面的几个表面标志在BD找荧光抗体，大鼠的，找来找去，488和633下，只能用上PE-CY7和APC-Cy7。如果不能合用的话，那根本就无法在488,633下做大鼠 CD3 CD4 CD8a CD45RA和CD161a的多色染（每个标志一个独立的荧光）

作者: niwanmao 时间: 2014-6-8 10:52

zark_00 发表于 2014-6-7 18:56
谢谢。再请教个问题，PE-CY7和APC-Cy7能一起用么，会有严重干扰无法做补偿么？我在biolegend上查了吸收峰， ...

BD的机器是肯定可以合用的。其它机器不清楚，但我觉得应该也是没问题。

作者: zark_00 时间: 2014-6-9 10:15

niwanmao 发表于 2014-6-8 10:52
BD的机器是肯定可以合用的。其它机器不清楚，但我觉得应该也是没问题。

再请问下，大鼠的CD45荧光抗体，选IgG3的好，还是选IgM的好，BD官网有这两种

作者: niwanmao 时间: 2014-6-9 12:44

zark_00 发表于 2014-6-9 10:15
再请问下，大鼠的CD45荧光抗体，选IgG3的好，还是选IgM的好，BD官网有这两种 ...

我个人更倾向于IgG

作者: FCM 时间: 2014-6-9 14:55

niwanmao 发表于 2014-6-8 10:52
BD的机器是肯定可以合用的。其它机器不清楚，但我觉得应该也是没问题。

这两个染料激发光谱重叠了,不能一起使用吧?

作者: zark_00 时间: 2014-6-9 15:27

FCM 发表于 2014-6-9 14:55
这两个染料激发光谱重叠了,不能一起使用吧?

我也有这个担心，但之前有些资料里，讲到有10色染之类的，里面也有这两种的合用。所以想找有没有人实际用过的，问问

作者: FCM 时间: 2014-6-9 15:46

zark_00 发表于 2014-6-9 15:27
我也有这个担心，但之前有些资料里，讲到有10色染之类的，里面也有这两种的合用。所以想找有没有人实际用 ...

我觉得是不可以一起用的,发射光谱重叠了(之前写错了,激发光谱是不一样的,一个是488,一个是635),收集的光都在同一个通道,都不是调补偿能解决的问题!不解

作者: FCM 时间: 2014-6-9 15:53
楼主手上有试剂吗?搞个样本做下,试试就知道了

作者: zark_00 时间: 2014-6-9 15:53
哪有试剂啊，还在设计阶段，就是怕买错了，到时候要挨骂呀

作者: niwanmao 时间: 2014-6-9 20:57

FCM 发表于 2014-6-9 15:46
我觉得是不可以一起用的,发射光谱重叠了(之前写错了,激发光谱是不一样的,一个是488,一个是635),收集的光 ...

发射光一样没关系的，因为他们一开始就不是在一条“道路”上走的。

我在一个科研实验中用过这两种染料。
@zark_00

作者: zark_00 时间: 2014-6-10 09:04
本帖最后由 zark_00 于 2014-6-10 09:07 编辑

niwanmao 发表于 2014-6-9 20:57
发射光一样没关系的，因为他们一开始就不是在一条“道路”上走的。

我在一个科研实验中用过这两种染料。 ...

非常感谢，再请问下，PerCP 和 APC 会有严重干扰么，在Aria机型488 633配制下。

如果没有，那么 FITC ,PE ,PerCP, PE-Cy7 APC APC-Cy7 这六种能否共用。

作者: FCM 时间: 2014-6-12 13:02

niwanmao 发表于 2014-6-9 20:57
发射光一样没关系的，因为他们一开始就不是在一条“道路”上走的。

我在一个科研实验中用过这两种染料。 ...

哦 ,谢谢指教,学习了

作者: gcz5340 时间: 2014-6-12 15:32

zark_00 发表于 2014-6-9 10:15
再请问下，大鼠的CD45荧光抗体，选IgG3的好，还是选IgM的好，BD官网有这两种 ...

BD和BC好像都有大鼠淋巴细胞检测试剂盒，可以参考一下克隆号单买。

作者: gcz5340 时间: 2014-6-12 15:40

zark_00 发表于 2014-6-10 09:04
非常感谢，再请问下，PerCP 和 APC 会有严重干扰么，在Aria机型488 633配制下。

如果没有，那么 FITC ,PE ...

理论上来说没有问题。很多厂家各根激光器都是一上一下平行关系，收集的时候角度特殊设计，一般各根激光器之间的发射光不会相互干扰。也有像BC的FC500就是双激光共轭设计的，这时候就不能区分PE-Cy7和APC-Cy7。
个人不太喜欢APC-Cy7，荧光比较弱，复合荧光素又容易降解，有时候补偿很难调的好看。

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