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标题: 求助：流式细胞术检测淋巴细胞比例出现两个中心是怎么... [打印本页]

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 17:03
标题: 求助：流式细胞术检测淋巴细胞比例出现两个中心是怎么...
大家好，我是做流式的新手。我想检测外周血单个核细胞中一种淋巴细胞的比例，进行了三染，结果FSC-SSC中出现两个中心是怎么回事？请了解的大侠帮忙解答。谢谢
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作者: niwanmao 时间: 2014-6-16 19:15
不知道你染的是什么标记，是否可以把原始文件放上来，我们可以根据反设门看得更明白。

作者: dragonhzqsmmu 时间: 2014-6-16 20:33
细胞活力的问题？粘连体细胞？之前分析小鼠脾脏细胞的时候就出现过类似的图片，结果老师说是活力的因素分为两群

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 21:38

niwanmao 发表于 2014-6-16 19:15
不知道你染的是什么标记，是否可以把原始文件放上来，我们可以根据反设门看得更明白。 ...

APC PE 和FITC ；这个就是原始的SSC-FSC图了是其中三个分成两群比较明显的。老师还需要什么图？
我的细胞是人的外周血单个核细胞，提取过后-80℃冻存了两个月，不知道会不会有影响

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 21:39

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-16 20:33
细胞活力的问题？粘连体细胞？之前分析小鼠脾脏细胞的时候就出现过类似的图片，结果老师说是活力的因素分为 ...

我的细胞冻存过不知道会不会与这个有关

作者: dragonhzqsmmu 时间: 2014-6-16 21:44

axie1126 发表于 2014-6-16 21:39
我的细胞冻存过不知道会不会与这个有关

这个应该影响蛮大的，复苏后有没有37度细胞孵箱放过夜，感觉PBMCs冻存后复苏活力不高

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 21:46

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-16 21:44
这个应该影响蛮大的，复苏后有没有37度细胞孵箱放过夜，感觉PBMCs冻存后复苏活力不高 ...

没有呢复苏完之后洗了两遍细胞计数后就开始染色了

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 21:55

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-16 21:44
这个应该影响蛮大的，复苏后有没有37度细胞孵箱放过夜，感觉PBMCs冻存后复苏活力不高 ...

请问你们一般复苏PBMCs后一般怎么处理呢？我是第一次做，也是实验室别人以前这样做过。不过她们的是鼠的脾脏细胞，结果还可以。

作者: niwanmao 时间: 2014-6-16 22:07

axie1126 发表于 2014-6-16 21:38
APC PE 和FITC ；这个就是原始的SSC-FSC图了是其中三个分成两群比较明显的。老师还需要什么图？
我的 ...

冻存过的一般会有影响。
我问的是你用的三个抗体分别是什么？不是问你荧光

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 22:29

niwanmao 发表于 2014-6-16 22:07
冻存过的一般会有影响。
我问的是你用的三个抗体分别是什么？不是问你荧光 ...

鼠抗人CD19 CD24 CD38

作者: niwanmao 时间: 2014-6-16 22:33

axie1126 发表于 2014-6-16 22:29
鼠抗人CD19 CD24 CD38

选中CD19＋的细胞，然后再看它们在FSC/SSC散点图上分布如何

作者: axie1126 时间: 2014-6-16 22:46

niwanmao 发表于 2014-6-16 22:33
选中CD19＋的细胞，然后再看它们在FSC/SSC散点图上分布如何

这就是您前面说的反设门吧我待会试一下这会软件又开始罢工了。回头再请教您。非常感谢！

作者: dragonhzqsmmu 时间: 2014-6-17 10:35
你这个之前论坛里面有人提出过类似的问题，不过他的是小鼠的，
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2556-1-1.html

作者: niwanmao 时间: 2014-6-17 19:01

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-17 10:35
你这个之前论坛里面有人提出过类似的问题，不过他的是小鼠的，
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2556-1- ...

@dragonhzqsmmu 搜的不错，我倒忘记这个帖子，这个帖子的14楼讲得比较详细@axie1126

作者: didi_zhou 时间: 2014-6-19 18:33
冻存的影响，一些细胞活性已经不好，细胞膜折光性改变。

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