流式中文网

标题: 请问检测CD4和CD8细胞的时候，需要同时标记CD3吗？ [打印本页]

作者: 田田 时间: 2014-10-17 20:36
标题: 请问检测CD4和CD8细胞的时候，需要同时标记CD3吗？
如题，本人要做大鼠外周血和脾细胞的流式，打算检测CD4，CD8和Treg细胞（CD4 CD25 FOXP3）。目前有几个问题：
1、请问需要同时标记CD3吗？
2、Treg细胞检测时需要标记3个抗体吗？可否只标记CD4 CD25 或CD4 FOXP3？
从未做过流式，望大家多多帮助，给予解答~谢谢了

作者: niwanmao 时间: 2014-10-17 20:36
如果你要计算CD4＋细胞比例，那么要加CD3.
Treg的问题在另一个帖子中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3736-1-1.html）已经回答，CD25不能少。

作者: 田田 时间: 2014-10-17 20:54

niwanmao 发表于 2014-10-17 20:44
如果你要计算CD4＋细胞比例，那么要加CD3.
Treg的问题在另一个帖子中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread- ...

我发每个帖子都能见到您，真是太谢谢了~

我是想测CD4/CD8……

作者: niwanmao 时间: 2014-10-17 21:03

田田发表于 2014-10-17 20:54
我发每个帖子都能见到您，真是太谢谢了~

我是想测CD4/CD8……

加上CD3，会使你的结果更准确。

作者: xjwl8587 时间: 2014-10-24 18:30
我也来参加一下讨论。建议你一定要加CD3以及能区分死细胞和活细胞的dye。你的这个staining是interacellular staining。你在fix和perm的过程中会有很多死细胞，这些死细胞到最后都是false positive。如果最后你想发一篇好的paper而且碰到FACS的行家，他们肯定会问你你有没有排除死细胞。你可以试一试这个false positive很多

作者: 田田 时间: 2015-1-16 12:35

xjwl8587 发表于 2014-10-24 18:30
我也来参加一下讨论。建议你一定要加CD3以及能区分死细胞和活细胞的dye。你的这个staining是interacellular ...

谢谢。现在马上要做实验了，请问检测时是同时标记CD3 CD4 CD8三种抗体吗？
还是分别检测CD3CD4和CD3CD8？

作者: niwanmao 时间: 2015-1-16 13:30

田田发表于 2015-1-16 12:35
谢谢。现在马上要做实验了，请问检测时是同时标记CD3 CD4 CD8三种抗体吗？
还是分别检测CD3CD4和CD3CD8？ ...

同时标记最好。

作者: xjwl8587 时间: 2015-4-6 18:35

田田发表于 2015-1-16 12:35
谢谢。现在马上要做实验了，请问检测时是同时标记CD3 CD4 CD8三种抗体吗？
还是分别检测CD3CD4和CD3CD8？ ...

不好意思。才看到。我也建议同时标记。

作者: culturelily 时间: 2015-4-7 09:44

xjwl8587 发表于 2014-10-24 18:30
我也来参加一下讨论。建议你一定要加CD3以及能区分死细胞和活细胞的dye。你的这个staining是interacellular ...

但是，内染色加Live/dead dye是在fix/perm之前，跟表面因子一起染的

作者: niwanmao 时间: 2015-4-7 10:13

culturelily 发表于 2015-4-7 09:44
但是，内染色加Live/dead dye是在fix/perm之前，跟表面因子一起染的

fix和perm时一般不太会死细胞的：）

作者: 王旭弘 时间: 2020-9-8 14:39
谢谢老师的分享

作者: stepvenmei3 时间: 2020-11-11 17:39
有个问题想向大家咨询下：就是我在文献中看到有CD3+ T细胞gate下大量CD4-CD8-细胞这样子的情况，但我做出来的结果（同样gated on CD3+T cells）时这种CD4-CD8-T细胞的量很少。不知这是否是我样本（来源小鼠脾脏）的问题？但是我网上查了下资料，好像说这种CD3+CD4-CD8- T cells比例比较低？

截图上图是文献中的流式数据，下图是我的数据：[attach]20820[/attach][attach]20821[/attach]

作者: stepvenmei3 时间: 2020-11-11 17:41

stepvenmei3 发表于 2020-11-11 17:39
有个问题想向大家咨询下：就是我在文献中看到有CD3+ T细胞gate下大量CD4-CD8-细胞这样子的情况，但我做出来 ...

@niwanmao 请倪老师帮忙看看。。谢谢老师~如有打扰，还望谅解

欢迎光临流式中文网 (https://www.flowcyto.cn/bbs/)