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标题: AnnexinV中凋亡晚期的染料只有PI么？有没有其他的可以代替？ [打印本页]

作者: 黄鱼 时间: 2015-3-14 16:37
标题: AnnexinV中凋亡晚期的染料只有PI么？有没有其他的可以代替？
AnnexinV中凋亡晚期的染料只有PI么？有没有其他的可以代替？最好是不要发红色荧光的？因为我们的药物是红色的，用了PI后，药物颜色对PI荧光影响很大，请问，有什么好方法呀？？？？？流式千百回了，哎.....

作者: niwanmao 时间: 2015-3-14 17:46
可以用7-AAD，在650 nm检测，与fitc、PE通道补偿小。

作者: 黄鱼 时间: 2015-3-15 11:01
我们发现细胞凋亡时用PI染料和药物表阿霉素作用于细胞，都可以染细胞核DNA使之产生红色，无法用control组做对照，不知道怎样解决，如何把两者分开的呀？您说的用7-ADD是单染么？

作者: 黄鱼 时间: 2015-3-15 11:09

niwanmao 发表于 2015-3-14 17:46
可以用7-AAD，在650 nm检测，与fitc、PE通道补偿小。

我们发现细胞凋亡时用PI染料和药物表阿霉素作用于细胞，都可以染细胞核DNA使之产生红色，无法用control组做对照，不知道怎样解决，如何把两者分开的呀？可是7-ADD在546nm下，发647的红色荧光，和PI的615的红色荧光和表阿霉素的620左右的红色页眉办法分开的样子呀？

作者: niwanmao 时间: 2015-3-15 11:30

黄鱼发表于 2015-3-15 11:09
我们发现细胞凋亡时用PI染料和药物表阿霉素作用于细胞，都可以染细胞核DNA使之产生红色，无法用control组 ...

一般问题不大。
实在担心，就用DAPI或Hoechst系列染料吧：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3992-1-1.html

作者: macxuao 时间: 2015-3-16 23:39
做过预实验表阿霉素荧光补偿调不过来。

作者: niwanmao 时间: 2015-3-17 08:34

macxuao 发表于 2015-3-16 23:39
做过预实验表阿霉素荧光补偿调不过来。

那就用紫外激光的核酸染料，dapi或hoechst系列。

作者: FCS 时间: 2015-3-17 15:36
如果没有紫外激光，改用BRDU-FITC，或caspase3-FITC如何？

作者: susu 时间: 2015-3-21 22:51
现在有很多染料可以代替PI来区分死活细胞。我们实验室采取方案是，细胞带绿光，就用APC的AnnexinV和Pi搭，有阿霉素的通常会在二三通道都有光，所以我们不选7AAd，而是用AnnexinV—Fitc和eflour660活细胞染料（在第四通道的，ebioscience公司的，BD公司也有这种染料，名称叫法不同）搭配。

作者: susu 时间: 2015-3-21 22:58
我们机器配有紫色激光，405的，所以，在遇到学生转染绿光阳性细胞加阿霉素后，等于一二三通道都会有光，这时就要用紫光激发的V450活细胞染料代替PI，Bd公司的，详细的可以找销售咨询

作者: 972676742 时间: 2016-6-2 14:23

niwanmao 发表于 2015-3-17 08:34
那就用紫外激光的核酸染料，dapi或hoechst系列。

如果细胞自带GFP和RFP，凋亡选择APC以及DAPI，补偿都需要做吗？

作者: Arcrain 时间: 2016-6-2 16:01

972676742 发表于 2016-6-2 14:23
如果细胞自带GFP和RFP，凋亡选择APC以及DAPI，补偿都需要做吗？

这个搭配基本不需要做补偿了。（488nm for GFP，561nm for RFP，640nm for APC，405nm for DAPI）。DAPI也能染活细胞，所以可以考虑一下换一种405nm激发的膜拒止核酸染料（就是不染活细胞只染死细胞），这个几家公司都有的。比如sytox blue。这样可能会好些。

作者: 972676742 时间: 2016-6-6 12:22

Arcrain 发表于 2016-6-2 16:01
这个搭配基本不需要做补偿了。（488nm for GFP，561nm for RFP，640nm for APC，405nm for DAPI）。DAPI ...

感谢！

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