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标题: 双阴性T细胞 [打印本页]

作者: mingxu95 时间: 2016-12-23 11:20
标题: 双阴性T细胞
倪老师及各位站友：最近进行数据分析时发现T细胞里面有大量双阴性(CD4-CD8-)T细胞，并且每个个体出现的比例相差较大（小于10%-大于40%），以致于进行不同组T细胞数目对比时原本的显著性差异都要消失了，但是当对比CD4+ T细胞时，和原来比并没有发生很大差异。那么，双阴性细胞大量出现到底什么原因？是流式仪的问题吗？个体之间双阴性比例差异大又有可能是什么造成的呢？@niwanmao

作者: niwanmao 时间: 2016-12-24 16:15
请参考我们以前发过的资料《T淋巴细胞在CD4/CD8散点图上究竟分为几群？》

作者: mingxu95 时间: 2016-12-25 10:00

niwanmao 发表于 2016-12-24 16:15
请参考我们以前发过的资料《T淋巴细胞在CD4/CD8散点图上究竟分为几群？》

谢谢倪老师

作者: mingxu95 时间: 2016-12-25 10:03
可能这个问题比较复杂，首先外周出现double negative T cell本身就很少见，其次我做的是HIV感染个体，CD3,CD4等marker会出现下调，因此，不是那么好解决，等我搞定以后再回复大家吧。谢谢

作者: niwanmao 时间: 2016-12-25 15:09

mingxu95 发表于 2016-12-25 10:03
可能这个问题比较复杂，首先外周出现double negative T cell本身就很少见，其次我做的是HIV感染个体，CD3,C ...

外周血的DNT应该都有的啊，只是比例不太高而已，HIV感染应该只是CD4＋比例降低，但荧光强度不应该降低才对啊。

作者: mingxu95 时间: 2016-12-26 08:38

niwanmao 发表于 2016-12-25 15:09
外周血的DNT应该都有的啊，只是比例不太高而已，HIV感染应该只是CD4＋比例降低，但荧光强度不应该降低才 ...

我觉得DNT应该在10%以下，但是竟然有些个体达到了40%多，所以很奇怪。
HIV感染是会引起细胞表面marker表达下降的，而且不止一种，所以荧光降低也是一种可能。

作者: niwanmao 时间: 2016-12-26 19:31

mingxu95 发表于 2016-12-26 08:38
我觉得DNT应该在10%以下，但是竟然有些个体达到了40%多，所以很奇怪。
HIV感染是会引起细胞表面marker表 ...

对于那些DNT达到40％的，建议做一下细分，看看有没有可能是NKT，或者是某种T细胞亚群，或者淋巴瘤细胞？

作者: mingxu95 时间: 2016-12-27 08:30

niwanmao 发表于 2016-12-26 19:31
对于那些DNT达到40％的，建议做一下细分，看看有没有可能是NKT，或者是某种T细胞亚群，或者淋巴瘤细胞？ ...

恩，good idea

作者: 小憨 时间: 2016-12-27 18:10
人外周血中的CD3+CD4-CD8-的细胞群并不是均一的，里面还包括γδ T细胞、NKT细胞、DN αβ T细胞以及一些其他未知的细胞亚群，这些细胞的免疫功能都是不一样的，其数量变化也跟病人的免疫功能相关。建议用多色流式方案多检测几种类型的免疫细胞，但墙裂希望还是做绝对计数比较好，因为病人的CD4比例是下降的，按道理其他类型的T细胞亚群比例是要相对上升的，当CD4非常少的时候也可能出现DN的比例上到40%以上。
之前我们也检测过HIV病人的γδ T细胞的数量，也一直在关注着方面的内容，所以非常期待读到你的研究报告，祝实验顺利~

作者: mingxu95 时间: 2016-12-28 08:40

小憨发表于 2016-12-27 18:10
人外周血中的CD3+CD4-CD8-的细胞群并不是均一的，里面还包括γδ T细胞、NKT细胞、DN αβ T细胞以及一些其 ...

非常感谢，深受启发

作者: wmj123456 时间: 2024-11-11 18:37

niwanmao 发表于 2016-12-24 16:15
请参考我们以前发过的资料《T淋巴细胞在CD4/CD8散点图上究竟分为几群？》

倪老师，如果在艾滋病方案中（CD3 CD4 CD8），外周血中DNT细胞占据淋巴细胞比例，超过10%，CD4+计数不符合艾滋病诊断标准，是不是说明这些人也有可能受病毒感染了？

作者: niwanmao 时间: 2024-11-11 19:59

wmj123456 发表于 2024-11-11 18:37
倪老师，如果在艾滋病方案中（CD3 CD4 CD8），外周血中DNT细胞占据淋巴细胞比例，超过10%，CD4+计数不符 ...

淋巴亚群并非确诊艾滋的检测方法，而是判断艾滋干预和治疗时机，以及判断治疗效果的

作者: wmj123456 时间: 2024-11-12 08:27

niwanmao 发表于 2024-11-11 19:59
淋巴亚群并非确诊艾滋的检测方法，而是判断艾滋干预和治疗时机，以及判断治疗效果的 ...

倪老师，是的，我是想问，在外周血检测中，如果DNT细胞比例超过10%，这个在临床上该怎么解释呀？

作者: niwanmao 时间: 2024-11-12 09:02

wmj123456 发表于 2024-11-12 08:27
倪老师，是的，我是想问，在外周血检测中，如果DNT细胞比例超过10%，这个在临床上该怎么解释呀？ ...

DNT比例过高，需结合其绝对数，以及增高的时间，根据诊断标准判断是否ALPS

作者: wmj123456 时间: 2025-1-12 21:16

小憨发表于 2016-12-27 18:10
人外周血中的CD3+CD4-CD8-的细胞群并不是均一的，里面还包括γδ T细胞、NKT细胞、DN αβ T细胞以及一些其 ...

请教下，在艾滋病患者中，CD4-CD8DNT比例是有可能上升的？目前有相关的文献资料吗？我搜了下，挺少的

作者: niwanmao 时间: 2025-1-13 07:35

wmj123456 发表于 2025-1-12 21:16
请教下，在艾滋病患者中，CD4-CD8DNT比例是有可能上升的？目前有相关的文献资料吗？我搜了下，挺少的 ...

艾滋关注的都是CD4+T绝对数，这个更关键
DNT比例的话，如果随着CD4+T减少，逻辑上相对肯定会增高的

作者: wmj123456 时间: 2025-1-16 09:18

niwanmao 发表于 2025-1-13 07:35
艾滋关注的都是CD4+T绝对数，这个更关键
DNT比例的话，如果随着CD4+T减少，逻辑上相对肯定会增高的 ...

倪老师，谢谢，这个有可能的，我也在观察样本中。
另外，想请您帮助分析一份样本，CD3-Percp,CD4-FITC，CD8-PE，制备好的样本，先后重复测试了2次。双阴性群体比例有差异，另外发现CD3/ssc中，有群弱阳的CD3。想问的是，这群弱阳CD3+T需要圈到CD3+里吗？可能是什么细胞？为什么2次测量的样本，CD4,CD8亚群比例有比较大的差异？

作者: niwanmao 时间: 2025-1-16 09:32

wmj123456 发表于 2025-1-16 09:18
倪老师，谢谢，这个有可能的，我也在观察样本中。
另外，想请您帮助分析一份样本，CD3-Percp,CD4-FITC，C ...

看了你的数据才明白，你这里的关键问题在于CD3 PerCP有问题，中性粒和T细胞的CD3几乎重叠在一起，请确认荧光通道是否正确，以及CD3抗体本身性能，看看究竟是哪个方面出了问题

只要CD3性能达标（阴性和阳性至少中间有一个数量级的间隔），就不会出现DNT增多的现象

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作者: wmj123456 时间: 2025-1-16 10:14
本帖最后由 wmj123456 于 2025-1-16 10:18 编辑

niwanmao 发表于 2025-1-16 09:32
看了你的数据才明白，你这里的关键问题在于CD3 PerCP有问题，中性粒和T细胞的CD3几乎重叠在一起，请确认 ...

倪老师，这个方案用了比较久了，很多样本的CD3阴阳性分群都是可以的，我觉得应该不是仪器或者抗体的问题。
另外，我没有看到CD3+在粒细胞有表达啊，主要是觉得从淋巴出来看CD3/SSC中，中间有群弱阳的信号，不是很圆润，这群您有看到吗？
看我的图，红框圈的这群

作者: niwanmao 时间: 2025-1-16 10:24

wmj123456 发表于 2025-1-16 10:14
倪老师，这个方案用了比较久了，很多样本的CD3阴阳性分群都是可以的，我觉得应该不是仪器或者抗体的问题。 ...

你切换的CD3和CD8散点图，就会发现原因所在，这个CD3这样的分群是不合格的，导致很多误判

作者: wmj123456 时间: 2025-1-16 10:27

niwanmao 发表于 2025-1-16 10:24
你切换的CD3和CD8散点图，就会发现原因所在，这个CD3这样的分群是不合格的，导致很多误判 ...

倪老师意思是PE和Percp补偿有问题？

作者: niwanmao 时间: 2025-1-16 10:29

wmj123456 发表于 2025-1-16 10:27
倪老师意思是PE和Percp补偿有问题？

不仅仅补偿，主要是CD3的分群，分不开，性能好的CD3，阴性群和阳性群中间距离至少1个数量级，且不存在明显的非特异性染色

作者: wmj123456 时间: 2025-1-16 10:32

niwanmao 发表于 2025-1-16 10:29
不仅仅补偿，主要是CD3的分群，分不开，性能好的CD3，阴性群和阳性群中间距离至少1个数量级，且不存在明 ...

CD3分群不太明显，可能是电压需要增大些，其余的样本也是类似这样分群，阳性可以圈，但是没有中间那一群。倪老师的意思是，这个样本中间这群是非特异性信号？

作者: niwanmao 时间: 2025-1-16 10:34

wmj123456 发表于 2025-1-16 10:32
CD3分群不太明显，可能是电压需要增大些，其余的样本也是类似这样分群，阳性可以圈，但是没有中间那一群 ...

一般PE和PerCP之间不会这么大补偿，而且不会出现补偿无法调整到位的现象，所以一个需要确认你们那个CD3的荧光素是不是真的PerCP？其次这个抗体性能建议做一下滴定最好

电压我不认为是关键

作者: wmj123456 时间: 2025-1-16 10:37

niwanmao 发表于 2025-1-16 10:34
一般PE和PerCP之间不会这么大补偿，而且不会出现补偿无法调整到位的现象，所以一个需要确认你们那个CD3的 ...

好的，谢谢倪老师，我再找找抗体的原因，谢谢

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