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标题: 电压和补偿的相关性 [打印本页]

作者: 112358answer 时间: 2019-9-20 13:07
标题: 电压和补偿的相关性
FITC和PE双染，FITC通道电压不变的情况下，PE通道电压增大，PE-FITC的补偿是会变高吗？同理，在保持PE通道电压不变的情况下，FITC通道电压增大，PE-FITC的补偿是会减小？
Ps：之所以会问这个问题，是在流式中经常用到非荧光素类荧光，实际荧光强度很强且难以调节，电压和补偿（经常达到百分之几百）让人头疼。

作者: niwanmao 时间: 2019-9-20 13:07
先把电压优化好，再调节补偿。调节补偿过程中，电压千万不要随意乱动。
电压的优化，站内之前发过：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5478-1-1.html

作者: wmj123456 时间: 2023-11-2 17:31

niwanmao 发表于 2019-9-20 13:07
先把电压优化好，再调节补偿。调节补偿过程中，电压千万不要随意乱动。
电压的优化，站内之前发过：http:// ...

倪老师，在实际的实验中，我通常是先用空白管和样本管看下电压是否合适，主要关注阴性群出来在103左右，阳性群不会太超过105.然后就以这个电压调节补偿。
但是有时候，会遇到两个荧光通道的补偿很大的情况，即A通道向B通道遗漏的信号很多，细胞几乎是一条斜线的情况，那如果要再更改电压，是增大A电压，降低B电压？这个没有太理解为什么这样做。

作者: niwanmao 时间: 2023-11-3 07:28

wmj123456 发表于 2023-11-2 17:31
倪老师，在实际的实验中，我通常是先用空白管和样本管看下电压是否合适，主要关注阴性群出来在103左右， ...

其实荧光渗漏本身是不受到电压影响的，我们印象中增大A电压使得B-A的补偿值小一点，这是一种算法上的错觉，但确实会使得补偿容易调一点

作者: wmj123456 时间: 2023-11-5 23:00

niwanmao 发表于 2023-11-3 07:28
其实荧光渗漏本身是不受到电压影响的，我们印象中增大A电压使得B-A的补偿值小一点，这是一种算法上的错觉 ...

倪老师，那如果是增大了A电压，仪器上补偿矩阵里的补偿的数值是会减小的吧，但是电压大小和补偿的数值没有关系，我总感觉不太理解了。。。。这里面的补偿的数值是一个概念吗？这里面提到电压的大小只会改变补偿的数值，是不是又矛盾了啊。那既然电压改变不了补偿，又为什么每次补偿调节后，就不要再动电压了？一旦动电压，就要再动补偿了？

作者: niwanmao 时间: 2023-11-6 08:11

wmj123456 发表于 2023-11-5 23:00
倪老师，那如果是增大了A电压，仪器上补偿矩阵里的补偿的数值是会减小的吧，但是电压大小和补偿的数值没 ...

compensation≠spillover
这是我表达的意思，也是你这个截图里面表达的意思

作者: wmj123456 时间: 2023-11-6 12:24

niwanmao 发表于 2023-11-6 08:11
compensation≠spillover
这是我表达的意思，也是你这个截图里面表达的意思

倪老师，明白了，谢谢

作者: wmj123456 时间: 2024-7-17 15:41

niwanmao 发表于 2023-11-3 07:28
其实荧光渗漏本身是不受到电压影响的，我们印象中增大A电压使得B-A的补偿值小一点，这是一种算法上的错觉 ...

倪老师，我发现调节电压的时候，如果两个通道的电压数值差异很大，也会导致荧光补偿数值很大，所以这俩通道的电压数值要尽可能接近，请问是为啥呀？

作者: niwanmao 时间: 2024-7-17 15:55

wmj123456 发表于 2024-7-17 15:41
倪老师，我发现调节电压的时候，如果两个通道的电压数值差异很大，也会导致荧光补偿数值很大，所以这俩通 ...

可能跟你在用的仪器有关吧，应该不是这个规律

作者: wmj123456 时间: 2024-7-17 17:11

niwanmao 发表于 2024-7-17 15:55
可能跟你在用的仪器有关吧，应该不是这个规律

我可能少说了一句，譬如两个荧光通道本身补偿比较大的情况下，这俩通道的电压数值不要差异那么大。。。。

作者: JindongLi 时间: 2024-10-23 13:50
A，B通道电压100的时候，A通道信号是1000，漏到B通道的信号是100，这个时候补偿系数是0.1，如果把A通道电压调成10，A通道信号变成了100，这个时候漏到B通道信号还是100，因为B通道的电压是100（没有调节），这个时候补偿系数就是1。也就是前面说的，如果通道电压数值相差太多补偿就会变大。反之变小。
为什么通道B漏过去的信号没有变，因为漏过去的是荧光，只要激光器，滤光片和染料没有变化，B通道收到的光的强度就没有变。

作者: 将求索 时间: 2025-2-4 22:21

JindongLi 发表于 2024-10-23 13:50
A，B通道电压100的时候，A通道信号是1000，漏到B通道的信号是100，这个时候补偿系数是0.1，如果把A通道电压 ...

谢谢，这个回答解答了我的疑惑。在此附上AI的答案，方便后来人理解。

A 通道增益变化
如果你把 A 通道的增益从 100 V 调到 10 V，A 通道读数就会从 1000 降到 100（本质上是相同数量的光子打到 PMT，但因为增益变小，最后数字信号变小了）。
B 通道是否因为 A 通道增益变化而变化
在许多仪器设计里，B 通道有独立的 PMT 或独立的模拟前端增益。换言之，如果你没有去“动”B 通道的增益，那它就还会以原先的放大倍数来探测打到它的那些光子数。即便 A 通道的增益变小了，B 通道仍然能把泄漏到它滤光路径中的那些光子放大到相同的数字量级。

如果 A 通道的荧光实际发射强度（光子数）在样本和激光条件保持一致的情况下并没有真实变少（注：只是在 A 通道的读数上变少了，因为 A 通道增益被人为调低了），那么 B 通道依然能“看到”那部分同样数量的“漏过来”的光子。

更形象地说，你在 A 通道加了一个“弱望远镜”（小增益）去看同一片星空，所以 A 通道显示的亮度“看起来”就弱了；但在 B 通道那里还是用“强望远镜”（大增益）看这一片星空，对于那部分能通过 B 通道滤光片的星光就依然能够放大到相同数值。

作者: niwanmao 时间: 2025-2-5 07:55

将求索发表于 2025-2-4 22:21
谢谢，这个回答解答了我的疑惑。在此附上AI的答案，方便后来人理解。

A 通道增益变化

准确的说，是Spillover和Compensation的区别

作者: Bruce_Shi 时间: 2025-2-12 16:13
豁然开朗，感谢

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