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标题: 各位大神，DC细胞成熟度问题求助！ [打印本页]

作者: Arles331 时间: 2022-1-9 16:37
标题: 各位大神，DC细胞成熟度问题求助！
本帖最后由 Arles331 于 2022-1-11 19:52 编辑

由于之前做了C57小鼠肿瘤样本流式检测，当时的设计由师姐进行。现在发现师姐的设计有问题，想请教各位大神老师和战友，是否CD45+CD11C+MHC II+可代表成熟DC细胞。

追加提问，可以请各位老师帮忙看一下我的CD11c+圈门是否正确吗？

作者: niwanmao 时间: 2022-1-9 16:37
MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞因子IL-1β和IL-6，如果该因子也高，就可以充分证实成熟了。

作者: Arles331 时间: 2022-1-9 20:05

niwanmao 发表于 2022-1-9 19:28
MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞 ...

谢谢倪老师，还想请教您一下CD80+CD86+和上述CD11c+MHC II+两种方法间是否存在优劣关系？

作者: wxd 时间: 2022-1-10 11:33
CD11c是小鼠DC的标志性Marker，不代表DC是否成熟，如果是骨髓诱导DC的话，通常用表达CD11c细胞的比例表示DC的纯度。CD80+CD86也可用于表示DC的成熟，但是如果不与CD11c一起染色的话，只适用于纯的DC细胞系，用于由多种免疫细胞存在的肿瘤模型是不行的。因此楼主师姐设计的CD11c+MHC II+检测DC是更合适一些的。

作者: Arles331 时间: 2022-1-10 15:59
谢谢您，辛苦您了！受益良多，感谢对流式小白的帮助~

作者: Arles331 时间: 2022-1-10 16:00

wxd 发表于 2022-1-10 11:33
CD11c是小鼠DC的标志性Marker，不代表DC是否成熟，如果是骨髓诱导DC的话，通常用表达CD11c细胞的比例表示DC ...

感恩您！您辛苦了！感谢您的讲解和对流式小白的帮助~

作者: Arles331 时间: 2022-1-10 20:44

wxd 发表于 2022-1-10 11:33
CD11c是小鼠DC的标志性Marker，不代表DC是否成熟，如果是骨髓诱导DC的话，通常用表达CD11c细胞的比例表示DC ...

不好意思老师，还是想请教您一下我在圈门时是先圈CD45+再在其中圈出CD11c+MHC-II+还是先圈出CD45+CD11c+再选择其中的MHC-II+？

作者: Arles331 时间: 2022-1-10 20:44

niwanmao 发表于 2022-1-9 19:28
MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞 ...

不好意思倪老师，学生还是想请教您一下我在圈门时是先圈CD45+再在其中圈出CD11c+MHC-II+还是先圈出CD45+CD11c+再选择其中的MHC-II+？

作者: niwanmao 时间: 2022-1-11 07:34

Arles331 发表于 2022-1-10 20:44
不好意思倪老师，学生还是想请教您一下我在圈门时是先圈CD45+再在其中圈出CD11c+MHC-II+还是先圈出CD45+C ...

设门顺序不影响最终结果，但是可能会对准确度会有点影响，要结合你所用的荧光素分子决定如何设门顺序。

多数情况下，两者均可。

作者: Arles331 时间: 2022-1-11 08:50

niwanmao 发表于 2022-1-11 07:34
设门顺序不影响最终结果，但是可能会对准确度会有点影响，要结合你所用的荧光素分子决定如何设门顺序。
...

谢谢倪老师！您辛苦了~~

作者: Arles331 时间: 2022-1-11 13:34

niwanmao 发表于 2022-1-11 07:34
设门顺序不影响最终结果，但是可能会对准确度会有点影响，要结合你所用的荧光素分子决定如何设门顺序。
...

实在不好意思老师，能请您再帮我看看圈门是否正确吗？

作者: niwanmao 时间: 2022-1-11 14:34

Arles331 发表于 2022-1-11 13:34
实在不好意思老师，能请您再帮我看看圈门是否正确吗？

各坐标的抗体分别是什么？图形坐标光秃秃的。

作者: Arles331 时间: 2022-1-11 14:45

niwanmao 发表于 2022-1-11 14:34
各坐标的抗体分别是什么？图形坐标光秃秃的。

不好意思老师，横坐标是CD11c 纵坐标是SSC-A；gated in CD45+

作者: niwanmao 时间: 2022-1-11 18:14

Arles331 发表于 2022-1-11 14:45
不好意思老师，横坐标是CD11c 纵坐标是SSC-A；gated in CD45+

有两张图，另一张图呢？

作者: Arles331 时间: 2022-1-11 19:21

niwanmao 发表于 2022-1-11 18:14
有两张图，另一张图呢？

老师，两张是一样的；只是分属于不同的组别；因为两张的差异有点大，所以我把他们都放了上来。

作者: niwanmao 时间: 2022-1-11 19:35

Arles331 发表于 2022-1-11 19:21
老师，两张是一样的；只是分属于不同的组别；因为两张的差异有点大，所以我把他们都放了上来。 ...

不太可能啊。你把FCS文件传上来看看。

作者: Arles331 时间: 2022-1-11 19:56

niwanmao 发表于 2022-1-11 19:35
不太可能啊。你把FCS文件传上来看看。

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老师不好意思，我只成功传上来一个，另一个显示超过10M了，压缩后依然很大。实在不好意思老师。我可以发到您的邮箱吗？

作者: niwanmao 时间: 2022-1-12 07:45

Arles331 发表于 2022-1-11 19:56
老师不好意思，我只成功传上来一个，另一个显示超过10M了，压缩后依然很大。实在不好意思老师。我可以 ...

可以上传百度云或阿里云盘，然后分享链接。
最好两个一起传，看看究竟什么原因造成。电压是否一致？

作者: Arles331 时间: 2022-1-12 09:29

niwanmao 发表于 2022-1-12 07:45
可以上传百度云或阿里云盘，然后分享链接。
最好两个一起传，看看究竟什么原因造成。电压是否一致？ ...

谢谢老师！因为是委托他人做的，电压应该是一致的，第三方合作单位原则上应该保证条件一致。
链接：https://pan.baidu.com/s/1KP7x5XDLkhPN2VPhxblxhw
提取码：m0j5
--来自百度网盘超级会员V4的分享

作者: niwanmao 时间: 2022-1-12 14:11

Arles331 发表于 2022-1-12 09:29
谢谢老师！因为是委托他人做的，电压应该是一致的，第三方合作单位原则上应该保证条件一致。
链接：https ...

对小鼠，我的分析经验也是不是很足，下图仅供参考，希望其它更有经验的站友能够一起讨论一下：
[attach]22861[/attach]

作者: Arles331 时间: 2022-1-12 14:15

niwanmao 发表于 2022-1-12 14:11
对小鼠，我的分析经验也是不是很足，下图仅供参考，希望其它更有经验的站友能够一起讨论一下：

...

谢谢倪老师，您辛苦了~~

作者: Arles331 时间: 2022-7-11 01:12

niwanmao 发表于 2022-1-9 16:37
MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞 ...

倪老师您好，实在不好意思打扰您啦！我在您的提示下增加了IL-6细胞因子的检测，我想在文章中说明您提醒我的该部分内容，想在苦于不知道怎么查找相关的文献，是否可向您再次提问？实在不好意思，还耽误您时间找参考文献。

作者: niwanmao 时间: 2022-7-11 07:34

Arles331 发表于 2022-7-11 01:12
倪老师您好，实在不好意思打扰您啦！我在您的提示下增加了IL-6细胞因子的检测，我想在文章中说明您提醒我 ...

Immature, Semi-Mature, and Fully Mature Dendritic Cells: Toward a DC-Cancer Cells Interface That Augments Anticancer Immunity

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