关于用modfit分析凋亡的疑问

niwanmao

你的拟合结果应该是这样的才对啊。凋亡应该很少很少。

niwanmao

nrq4123 发表于 2013-10-1 10:17

                               
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我开始圈细胞没圈好。
那倪老师，G1/G2不是尽量使它的比值接近2吗？而且我按照您这个圈细胞的方法，和G1 ...

细胞周期就是用Triton破膜，所以不存在没破膜的说法。
可能还是乙醇固定这一步上，尝试一下将细胞产入乙醇溶液中，找一下站内相关资料。

至于拟合的时候G2/G1的比例，如果你获取细胞的时候G1峰位置放的合适，他们的比例是会接近2 ，但是如果G1的荧光道数偏小，那么他们就会小于2，G2/G1的比例1.5～2.5都是可以的。
凋亡细胞的门放在G1前即可，没有特别要求，关键是峰的拟合要正确反映真实峰的分布。

niwanmao

nrq4123 发表于 2013-10-1 12:38

                               
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非常感谢倪老师的回复，我想再请问下“峰的拟合要正确反映真实峰的分布”这句话的意思是，拟合出来的峰形 ...

是的，拟合的曲线尽量跟真实峰的分布接近。

乙醇固定不要用1.5ml的EP管，用大的falcon管。否则你是震荡不均匀的。

获取细胞的时候FL3电压调节就是调节G1、G2的间距，当你在geomean上看出两个峰之间接近2的比例时，就可以了。

niwanmao

nrq4123 发表于 2013-10-2 11:10

                               
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我们的仪器是贝克曼的，也不知道，有没有geomean这个指标，下次看看吧。

倪老师的回复给了我非常大的帮 ...

没有geomean就看其它荧光平均值的参数即可。

niwanmao

nrq4123 发表于 2013-10-24 10:33

                               
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倪老师，我又做了一批样品，用modfit分析的时候我发现，我放那些G1、G2峰的时候，出现的峰形比较接近我的 ...

apoptosis峰的位置不对，应该是尽量靠近G1峰，你现在放的位置应该是碎片位置。
在放峰的位置时，只是定位用，最后拟合的结果我觉得这两个都不对，所以你一方面要调位置，另一方面要调节模型中的G2/G1的ratio比值，从你这两个图看，我觉得你把ratio值设置为1.7比较合适。

niwanmao

nrq4123 发表于 2013-10-24 17:15

                               
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哦，凋亡峰位置不对呀，我注意下。
我前面两个图，fit前是放峰时候的图，还没有进行拟合。第二个就是根据第 ...

是的，G2/G1大致就这么判断。
至于是否符合真实结果，一是看曲线是否与真实结果接近，其次就是看RCS值。