PBMC相关图

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-3-17 14:36
图1是结肠消化下来的所有细胞，图2用ebioscience的活细胞试剂标记，图3是活细胞门内CD45标记，图4是图3门 ...

首先要说一下，这个CD45的电压太低了，阳性阴性没拉开。

1、图3的门内大部分都是淋巴细胞，或许混有一些巨噬细胞，如果需要证明是否全是淋巴细胞，需要用CD3、CD56、CD19三标确定。
2、圈淋巴细胞就跟科研一样，看你的目的而圈，所以不是存在公认的方法，但是对于在FSC/SSC散点图以及CD45/SSC的散点图上，淋巴细胞的圈门是有固定位置的，你圈的没有错，可以在第3个图后面再加一个FSC/SSC。
3、加CD14可以排除单核干扰，但是有了CD45，如果用SSC(log)的话，已经能够近乎完美排除单核细胞了，所以不是很有必要。

niwanmao

应该是你的PBMC提取有问题，建议参考这个PBMC提取的经典帖：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-827-1-1.html

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-3-16 21:40
谢谢倪老师，长知识了。但是我还想知道，第三第四幅图肠道林巴细胞怎么会是这种图？肠组织血细胞很少，也 ...

这就体现出细胞死活鉴别染料的重要性。组织消化后，很容易出现细胞死亡或活力欠佳的情况，此时，加一个细胞死活鉴别染料，可以排除掉大部分的非特异性染色。

对于你的实验，加个细胞死活鉴别染料和CD45，你图中的细胞分群就会很清楚了。现在因为被大量的死细胞或活力差的细胞干扰，再加上很多实体组织细胞，造成分群乱糟糟。

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-3-17 10:58
倪老师，您说的我都做了的。想上图回复您上不了啊。高级模式编辑不了啊，怎么办？ ...

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