请教流式抗体滴定与染色异常问题

niwanmao

一开始做流式就做滴定，这是非常好的习惯，需要大力表扬。

1、计算信噪比，就是阳性峰的median除以阴性峰的median。计算染色指数，则是阳性峰和阴性峰的median之差，除以阴性峰基底宽，两者都可以确定抗体滴定最佳浓度。肉眼看似乎是0.63ug/ml或1.25ug/ml。

2、CD8弱阳性的那群是正常的NK细胞或Tc细胞。一般正常人应该不是很多的，你这个标本是什么病人？

3、建议加一个PI染料或7-AAD等鉴别细胞死活，上机前1分钟加入，不排除这种非特异性染色是由于死细胞引起。

4、同3

niwanmao

jiangmeng 发表于 2016-12-1 18:57
老师，如果该细胞的某抗原的表达本来就很低，这个时候需不需要进行滴定，或者这种情况该如何选择合适的抗 ...

抗原表达本身就低，也是可以滴定的，可以找一种表达该抗原比较强的细胞进行滴定，因为你要找的是合适的抗体使用浓度，跟细胞无关。

如果使用推荐量，阴性和阳性分得开，并不意味着是最佳，如果有可能最好滴定。

niwanmao

jiangmeng 发表于 2016-12-2 05:49
但是好像在您一个帖子里面说，每种细胞可能有不同的最佳滴度。
打个比方，我做小鼠骨髓细胞和外周血细胞 ...

用高表达CD34的细胞，例如某些白血病细胞滴定。

niwanmao

minazeng 发表于 2017-9-24 23:24
倪老师，您好！ 我想请教一下，多色染色也必须滴定吗？因为我现在做的是4-5色的，如果每个颜色都滴定的话 ...

可以先按照常规用量做一遍，对表达效果欠佳的，再进行滴定。这样节省滴定工作量。

niwanmao

minazeng 发表于 2017-9-25 08:42
哦哦，原来如此，就是我现在已经做出来了，那请问老师表达效果好不好的具体标准有么？比如像您在前面提及 ...

如果不进行滴定的话，就单纯根据工作经验（根据样本中正常细胞的分群情况）判断。

niwanmao

家的感觉 发表于 2017-9-25 15:52
弱弱问一下倪老师，平时多色分析时加的死活染料比如7-AAD，是不是不用和其他染料调节补偿？因为分析时圈 ...

也需要的。

分析要圈7-AAD阴性的活细胞。

niwanmao

家的感觉 发表于 2017-9-26 08:16
既然分析的时候是圈定7-AAD阴性，那么7-AAD对其他荧光的溢漏还有吗？
调补偿也和一般的多色一样调整是吗 ...

你的理解都是正确的。

niwanmao

1269189831 发表于 2018-6-7 11:39
倪老师 对于细胞表达全阳的抗体如何滴定计算信噪比呀？染色样本mean值/未染色样本mean值？ ...

不会有全阳的标记吧，即使是CD45，也有红细胞可做阴性参照

niwanmao

seall 发表于 2018-12-6 00:13
倪老师， 滴定的时候需要用封闭抗体进行封闭吗，还有染死活细胞的燃料需不需要加，是不是应该跟正常染色条 ...

如果有条件的话，当然一致是最好。
但是因为关键点是在确定最佳浓度，所以封闭、死活染料可以不用加，因为加不同浓度大家的条件是一致的。

niwanmao

熊峰 发表于 2019-4-16 13:29
倪老师，如果我实验时候是分析CD3+CD8+的细胞，在做CD8滴定的时候需不需要把CD3全都加上？为什么？ ...

不需要，分群很容易分。