小鼠定义B细胞群体百分比及绝对计数问题

niwanmao

十二郎 发表于 2015-7-30 17:44
回复如下：
1、若裂红的话，图一中B细胞群体占total细胞的百分比我认为就不对了。
2、楼上回答的我懂，我 ...

一般流式上所谓的占total比例都是指裂红之后的有核细胞。

至于总数，小鼠脾脏能有多大，全磨掉嘛，然后制备成悬液，至于损耗是不可避免的，但是可以接受的。绝对计数可以采用两种方法：
1、先计数悬液内细胞总量（用计数板），然后再检测某群体比例，相乘即可。
2、加入绝对计数beads，直接进行绝对计数。

niwanmao

十二郎 发表于 2015-7-30 21:45
倪老师好，因为以前都是用百分比表示差异，后来看到很多文章也会统计骨髓或脾脏中B细胞的绝对计数，就想 ...

你磨一整个脾脏，但是标记和检测只需要取 其中一点点检测就可以了啊，例如你脾脏最后悬液总体积10ml，你取100ul检测，最后测出来这100ul里面有10E5细胞，那么就说明脾脏悬液里面细胞总数是10E7，又省抗体，又能达到目的。

离心后上清几乎不会有残留的白细胞，如果有，那么就是离心机问题。不要纠结这种问题。