斑马鱼眼睛细胞转染GFP的流式分析

niwanmao

对于小颗粒的检测还是存在一定技巧的，我个人的建议如下：
1、建议在检测前跑一下较长时间的蒸馏水，然后再上一管蒸馏水，设置合适的阈值，查看FSC/SSC散点图（两个参数均调节为LOG模式）的信号多少，确定管路干净了再跑。

2、将FSC和SSC均调节为LOG模式，以利于小颗粒信号能到散点图中央区域附近。


3、可以考虑用空载质粒的斑马鱼眼睛细胞做阴性对照，然后再检测GFP转染的细胞，如果有阳性，马上就可以圈出来，再反过来看这类GFP阳性细胞在FSC/SSC上的位置，这样应该就可以将细胞与干扰信号区分开。

4、（3的替代方案）可以找2um和4um的微球（Spherotech或Rainbow），先跑一下，确定位置，圈上门，同时也了解了背景干扰信号的多少，心里有数，然后再上斑马鱼眼睛细胞，就可以在FSC/SSC上较明确地圈出斑马鱼眼睛细胞，然后再看这类细胞的GFP表达情况（此处最好也有空载质粒做阴性参照）。