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发表于 2024-12-17 10:01:31
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1. 排除MSC不纯的问题?
虽不能完全排除MSC不纯的可能性,但可能性较低。虽然CD73、CD90呈阳性,CD45呈阴性,符合MSC的主要鉴定标准,但如果有可能,可以再加做几个ISCT建议的CD34、CD11b、CD19和HLA-DR等阴性标志物。如果这些阴性标志物中有阳性表达,则表明细胞群体中可能存在其他类型的细胞。
2. 同型的本底荧光,CD105染的PE相比其他指标比较强,是否同型抗体的问题多一些,可能选择的不合适,特异性不强,或者是抗体用量高了?
在科研中,同型对照设门虽然常用,但并非绝对可靠,之前我发过不少帖子说明。
因为很多时候同型对照跟靶标抗体在结合能力、亚型上未必匹配。
如果同型对照的荧光强度较高,可能会导致阳性细胞的比例被低估。
关于同型对照需要再多说几句:确保使用的同型对照抗体与CD105抗体的亚型(如IgG1、IgG2a等)一致,并且来自同一家公司。不同批次的同型对照也可能存在差异,尽量使用同一批次的同型对照。
3. 没有调节FITC对PE的溢漏,这个应该对结果影响不大,因为同型和样本的补偿是一样的?
我不知道你们FITC通道有没有用抗体,如果用了,还是需要调的 |
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