找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 3397|回复: 8

[干细胞相关] CD105阳性表达结果

[复制链接]
发表于 2017-6-20 15:01:59 | 显示全部楼层
从附件的图片看,你这些细胞90%以上都是凋亡细胞或碎片,所以会对结果影响很大,会产生很明星的非特异性染色,所以使得你的结果出现很多超出常理的问题。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2017-6-20 18:07:00 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2017-6-20 15:49
那倪老师怎么从图中判断90%以上的是细胞碎片和凋亡呢,在FSC/SSC中具体位置在哪里,怎么判断的,是反向设门 ...

就是你圈中的这类勉强算活细胞,剩余的信号里面FSC小而SSC偏大的就是凋亡细胞,而FSC小、SSC小的就是碎片。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2017-6-21 19:42:10 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2017-6-21 10:25
谢谢倪老师,不过那个流星怎么给您啊,还有老师我是不怎么会反向设门,老师有空的话就用我发的图,您在图 ...

流星不要紧。
你这几个图不需要通过反向设门就看的出来明显的凋亡和碎片。
反向设门就是你首先圈出某个CD分子阳性的细胞群,然后反过去看这些细胞在FSC/SSC散点图上的分布。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2024-12-17 10:01:31 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2024-12-16 23:30
倪老师,检测的MSC,做了105,73,90,CD45这4个指标,用的同型设门,目前出现个问题,CD105用同型设门的 ...

1. 排除MSC不纯的问题?
虽不能完全排除MSC不纯的可能性,但可能性较低。虽然CD73、CD90呈阳性,CD45呈阴性,符合MSC的主要鉴定标准,但如果有可能,可以再加做几个ISCT建议的CD34、CD11b、CD19和HLA-DR等阴性标志物。如果这些阴性标志物中有阳性表达,则表明细胞群体中可能存在其他类型的细胞。


2. 同型的本底荧光,CD105染的PE相比其他指标比较强,是否同型抗体的问题多一些,可能选择的不合适,特异性不强,或者是抗体用量高了?
在科研中,同型对照设门虽然常用,但并非绝对可靠,之前我发过不少帖子说明。
因为很多时候同型对照跟靶标抗体在结合能力、亚型上未必匹配。
如果同型对照的荧光强度较高,可能会导致阳性细胞的比例被低估。

关于同型对照需要再多说几句:确保使用的同型对照抗体与CD105抗体的亚型(如IgG1、IgG2a等)一致,并且来自同一家公司。不同批次的同型对照也可能存在差异,尽量使用同一批次的同型对照。


3. 没有调节FITC对PE的溢漏,这个应该对结果影响不大,因为同型和样本的补偿是一样的?
我不知道你们FITC通道有没有用抗体,如果用了,还是需要调的
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2025-5-23 12:32

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2025 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表