全血流式一些问题

liyi881228

本人最近开始做流式，遇到一些问题，特来请教，先谢谢大家了～
1、50uL 全血加多少抗体合适，买了BD和Biolegend的抗体，BD的抗体基本上CD3,CD8等都要加20uL，个人觉得加多了太浪费，因为样本还要做单标调补偿，所以我只加了1uL，但是貌似效果不太好，柱状图显示的峰都不完整，阳性的也没有出来两个峰只是往右偏移了，有的单标的阳性率和三标样本的阳性率相差还蛮多的，比如PD1，单标的样本比例为17%，CD3,CD8,PD1三标样本PD1阳性率只有5%，是不是我样本处理的不好的缘故？所以想请教，50uL全血，三标样本和单标调补偿样本加几uL抗体合适

2、如果要测CD3,CD8,PD1,CTLA4四个指标，但我们的仪器一次最多只能检测三个比如CD3,CD8,PD1，那CTLA4要怎么检测，是单染CTLA4还是要三色标记CD3,CD8,CTLA4？必须要做单染调补偿吗，如果每次检测多份不同人的血标本，每份血标本都需要做单染调补偿吗，还是第一份做单染调补偿后，其他的就不用调了？
CD3-FITC,CD8-ECD,PD1-APC,CTLA4-PE

liyi881228

3、细胞洗脱液和Cell Staining Buffer说的是一种东西吗，自己配制的话用PBS可以吗，PBS里面需要加血清吗，还是要加BSA，具体浓度是多少呢

liyi881228

niwanmao 发表于 2013-8-27 11:46

                               
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1、如果你要用50ul全血，那么至少半量还是需要的，尤其是象你买的全量20ul的话，血的体积可能还得减少。用1 ...

倪老师，你好，我想问一下，阴性峰像您说的调到靠近10E1的位置，是根据什么来判断呀，是看阴性峰的完整程度吗，是让阴性峰以完整的峰形出现在10E1附近是吗