小鼠骨髓细胞流式分析设门问题

Lance

按照附件中文献方法分析小鼠骨髓内各类干细胞的分化，KSL群检测不到，KloLlo群不知如何界定，KL群自己做的看不到MEP细胞，不知道GMP与CMP是否正确，初做流式，fcs数据附件里可见，麻烦各位老师有时间帮忙看看。Marker: Lineage staining utilized a cocktail of biotinylated anti-mouse antibodieMac-1 (CD11b), Gr-1 (Ly-6G and 6C), Ter119 (Ly-76), CD33, CD4, CD8a(Ly-2), and B220 (CD45R) (BD Biosciences). For detection and sorting, we
used streptavidin conjugated with PE/Cy7 (BD,Biosciences). Directly conjugated antibodies used were as follows: cKitAPC (CD117) and Flk2-PE (CD135) (BD Biosciences); Sca1-PE/Cy5.5 (Ly6A/E, Caltag); and CD34-FITC, CD16/32-Alexa700, and IL-7Ra(CD127)-BDv450 (eBioscience)。
想咨询一下几个问题：
1.Lin-gated 怎么设门
2.KL门内GMP，CMP是否划分正确，为什么没有MEP
3.自己的实验和文献中的差有两个细胞群，是细胞含量太少没有还是其他的原因。
4.K-loL-lo群怎么界定比较精准。
谢谢

Wnt Signaling in the Niche Enforces Hematopoietic Stem Cell Quiescence and Is Necessary to Preserve Self-Renewal In Vivo
https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=NzM1OXw2YWJkZTRjOHwxNzQ3NDU3MjkxfDB8


Flow Cytometry Analysis of Murine Hematopoietic Stem Cells

https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=NzM1OHxjMDFlMjhjOHwxNzQ3NDU3MjkxfDB8

Lance

参考文献内的设门方法

Lance

niwanmao 发表于 2015-1-9 14:17
Lin指的是一系列抗原，你的实验中指的是Mac-1 (CD11b), Gr-1 (Ly-6G and 6C), Ter119 (Ly-76), CD33, CD4,  ...

Lin biotin用PE-CY7 标记了 数据里有
KLS 我猜测 K代表cKit L代表Lineage S 代表Sca
第一篇参考文献里面 有具体细胞表面标记物 在前面
第二篇参考文献 应该是和第一篇一样的方法 但是 图案不一样 文献中的细胞是富集的 可能比较多 但是我的压根就没有
老师是怎么判断抗体未标记好的 如需要我把单染样品数据也给您发过去
谢谢

Lance

我的Lin-是这样子设门的 左侧为Lin阴性 不知道是否正确

Lance

niwanmao 发表于 2015-1-9 15:45
不富集，干细胞是极其稀少的，所以在你的标本里面看不出明显的干细胞，CD117几乎均阴性，见下图。

倪老师，您的图我没太看懂，刚接触流式，我想问下我这样Lin-设门对不对。

Lance

niwanmao 发表于 2015-1-9 15:45
不富集，干细胞是极其稀少的，所以在你的标本里面看不出明显的干细胞，CD117几乎均阴性，见下图。

检测的是药物作用后 骨髓内细胞分化 做不到富集 即使没有HSC数据 想问下 关于 GMP和CMP的圈定是否正确 因为实验有12个样本 每个都是这样子的

Lance

niwanmao 发表于 2015-1-9 15:45
不富集，干细胞是极其稀少的，所以在你的标本里面看不出明显的干细胞，CD117几乎均阴性，见下图。

Lin- 对应Pe-CY7
Sca- Pe-CY5.5
cKit-APC
CD16/32-AF700
Flk2-PE
Il7a-V450
CD34-FITC
老师您发的第二张图 我没看懂想说明什么 我是新手 能麻烦您解释下么