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[细胞因子检测] 大鼠th1/th2/th17/treg比例的检测

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发表于 2015-4-12 16:21:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏5流星未解决
最近要做大鼠的外周血的th1/th2/th17/treg比例的检测,参考了老师的意见,将大鼠分管如下:      
1. 空白管;
2.CD4+-FITC/CD 25+-APC/Foxp3-PE;
3.CD 4+-FITC/IL4-PE/IL 17A-pecy7 /IFn- γ-ALEXA 647
4.所对应抗体的同型对照管(共有五个,共一管)。


问题,在看了倪老师的关于FMO的解释,可不可以把同型对照去掉,然后设置FMO对照,设计如下:
前三管同上,
第四管.Foxp3的FMO,CD4+-FITC/Foxp3-PE 。
第五管.Foxp3的FMO,CD 25+-APC/Foxp3-PE。
第六管,IL的FMO ,IL4-PE/IL 17A-pecy7 /IFn- γ-ALEXA 647。
不知道我理解的FMO正确否。




2.关于破膜固定,我打算定EB的Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set Kit,但是上面标准了Foxp3专用,IL的破膜固定可不可以也有这个盒子?


3.关于刺激阻断我定的EB的Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X),因为只有IL才会刺激,所以还好。


4.没有设置补偿管


不知道我的FMO设置的是否正确?还有固定破膜盒子,是否可以在几管之间通用,还是需要另外订其他的试剂?

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 楼主| 发表于 2015-4-13 07:37:28 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2015-4-13 00:34
建议加入CD3 PerCP/Cy5.5。
我之前用BD 的Foxp3 kit,没有专门订胞内的kit,也是可以获得很好的效果的,但e ...

出了foxp3,其他破膜和固定都用的BD的Foxp3 kit吗,补偿微球是一定要的吗
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 楼主| 发表于 2015-4-13 22:56:10 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2015-4-13 09:19
Foxp3有foxp3自己的kit,胞内细胞因子有胞内细胞因子的kit,理论上不能通用,因为一个是在细胞核,一个是 ...

好的,谢谢,所有抗体试剂已定
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 楼主| 发表于 2015-4-13 22:56:36 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-4-13 08:29
foxP3不设FMO问题不大,因为分群都比较清楚,除了CD25稍差。

一般FMO特别适合组合内只有一个检测指标,其 ...

谢谢倪老师的解答
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 楼主| 发表于 2015-4-17 13:57:33 | 显示全部楼层
mylive 发表于 2015-4-14 13:02
他这个实验应该不能选择cd4这个抗体吧?用pma刺激后,用cd4fitc 我从来都没有染上过。 ...

真的吗,这是做流式的老师很推荐的,,那什么CD4抗体比较好。
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 楼主| 发表于 2015-4-17 14:01:30 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-4-14 10:41
确实,@mylive 说到关键了。 @giamay  用CD3和CD8可能更好。

我也看见过这个,但是在倪老师你的另一篇资料中  Th17 检测原理和样品处理方法 中,你有提到  “PMA 对小鼠 CD4的影响很小,所以检测小鼠 Th1/Th2/Th17 时可用 CD4 直接设门”,对于大鼠,请指教。
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