最近要做大鼠的外周血的th1/th2/th17/treg比例的检测,参考了老师的意见,将大鼠分管如下:
1. 空白管;
2.CD4+-FITC/CD 25+-APC/Foxp3-PE;
3.CD 4+-FITC/IL4-PE/IL 17A-pecy7 /IFn- γ-ALEXA 647;
4.所对应抗体的同型对照管(共有五个,共一管)。
问题,在看了倪老师的关于FMO的解释,可不可以把同型对照去掉,然后设置FMO对照,设计如下:
前三管同上,
第四管.Foxp3的FMO,CD4+-FITC/Foxp3-PE 。
第五管.Foxp3的FMO,CD 25+-APC/Foxp3-PE。
第六管,IL的FMO ,IL4-PE/IL 17A-pecy7 /IFn- γ-ALEXA 647。
不知道我理解的FMO正确否。
2.关于破膜固定,我打算定EB的Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set Kit,但是上面标准了Foxp3专用,IL的破膜固定可不可以也有这个盒子?
3.关于刺激阻断我定的EB的Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X),因为只有IL才会刺激,所以还好。
4.没有设置补偿管
不知道我的FMO设置的是否正确?还有固定破膜盒子,是否可以在几管之间通用,还是需要另外订其他的试剂?
|