优化和验证流式受体占有率分析的最佳实践

Veblen

老师，我想请问一下流式检测受体占有率是不是需要知道一下几点：

1. 先通过加入过量的经荧光素标记的药物或荧光素标记的non-competitive的抗体，从而获得total receptor的水平（也就是total MFI）；

2. 实际实验过程中总是在一定的药物浓度前提下去计算受体占有率，也就是不同给药浓度条件下，受体占有率的值是不同的？

3. 用直接法计算受体占有率：需要得到荧光标记的抗药抗体MFI，然后用它除以上面的total MFI, 即为RO%;

4. 间接法就是去测与游离受体结合的检测抗体的MFI,再用1-它占total MFI的比例即为RO%. 在这里如果，抗体药物是过量的，是不是RO%等于1？  

5. 对于RO%的计算，一般是抗体药物浓度不饱和，也就是没有完全占据receptor，这样才符合实际情况吧？ 如果饱和了RO%就等于1？  一直在确认这个前提，确实有些不太懂。

希望老师费心一一解答一下，确实不太懂，期待老师对每个问题的回答，万分感谢。