小鼠Th1 Th17细胞比例异常，求指导

zhudamao · 发表于 2018-8-29 16:20:48

我染的小鼠Th1 Th17的比例跟文献的差异太大，求各位大神指点，附上结果

zhudamao · 发表于 2018-8-31 09:52:46

niwanmao 发表于 2018-8-30 08:36
1、前面的设门是如何设的？
2、抗体组合和荧光搭配是怎么样的？

老师您好
1. 门是根据空白管设定的
2. il-17的荧光是BV421 IFN-γ是PE-CY7

zhudamao · 发表于 2018-9-6 16:12:38

mybiosciences 发表于 2018-9-5 21:58
有没有加死细胞排除试剂？
这类实验一个加上这样的试剂的

没有加，因为是脾脏

zhudamao · 发表于 2018-9-6 16:14:48

niwanmao 发表于 2018-9-1 07:48
1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应 ...

CD3 BV510 CD4 FITC IFN PE-CY7 IL17 BV421 IL4 APC

zhudamao · 发表于 2018-9-6 16:15:44

niwanmao 发表于 2018-9-1 07:48
1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应 ...

试剂商建议我刺激8小时，老师您觉得有必要吗？

zhudamao · 发表于 2018-9-6 16:16:27

niwanmao 发表于 2018-9-1 07:48
1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应 ...

另外老师，刺激4小时跟6小时区别大吗？

zhudamao · 发表于 2018-9-10 14:43:54

mybiosciences 发表于 2018-9-8 23:03
另外，小鼠细胞染色之前一定要加CD16/CD32 FcR阻断剂阻断，否则染色会出问题。 ...

感谢建议，抗体已经买了一段时间了，不知道能不能马上换荧光

zhudamao · 发表于 2018-9-10 14:46:18

mybiosciences 发表于 2018-9-8 22:57
你用什么刺激物刺激的？
如果是蛋白刺激，需要刺激24h（提前6h加入阻断剂） ...

我用的是BD的刺激阻断合剂，货号550583 含有PMA 离子霉素 BFA

zhudamao · 发表于 2018-9-10 15:57:12

niwanmao 发表于 2018-8-30 08:36
1、前面的设门是如何设的？
2、抗体组合和荧光搭配是怎么样的？

老师您好，我这次延长了破膜时间，但是感觉效果一般，会不会是我的抗体加少了，我的CD3 CD4按照试剂商推荐的量加，试剂商用的1/4的量，各是0.5μL

zhudamao · 发表于 2018-9-10 16:47:01

本帖最后由 zhudamao 于 2018-9-10 16:50 编辑

各位老师，这是我最近的实验，1是空白，2-4是多标，请各位老师指导

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