荧光补偿求助

zml · 发表于 2013-4-24 19:07:07

想请各位老师帮忙看下补偿是否调节到位，谢谢了。
我的图和LMD文件在下面这个链接里。

http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... 60&fromuid=8714

zml · 发表于 2013-4-24 20:04:53

niwanmao 发表于 2013-4-24 20:01

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你跟@aivy 做的是一样的试剂盒？怎么散点图完全不同呢？
首先因为细菌太小，所以FSC/SSC散点图应该都采用 ...

我也很奇怪为什么不一样。这个我之前检测这个菌一直用LIN，所以用LIN了，如果我不调节补偿出来的图是跟aivy一样的

zml · 发表于 2013-4-24 20:19:41

niwanmao 发表于 2013-4-24 20:10

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用LIN能出来？细菌这么小，似乎应该跟我们临床上检测的血小板差不多吧，我们做血小板都得用LOG才能调出来 ...

可以，但是会比较集中到偏下的位置，不能调到很上的位置。请问老师，如果不做补偿的话，我直接用染料单标染色，确定阳性所在的位置就可以画门了么？

zml · 发表于 2013-4-24 20:56:47

niwanmao 发表于 2013-4-24 20:49

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画门的方法就是按照@aivy 那个帖子中我画的那样，那个设门方法比较公认。 ...

那请问老师可以这样画门么？

，是否是只有要明显的两群分出来就可以了呢‘?

zml · 发表于 2013-4-24 23:03:01

niwanmao 发表于 2013-4-24 22:39

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是斜着画，但是还是画不规则门更好，十字门你这个比例计算麻烦。

这样呀·，老师我想请您帮我看下我这样的步骤和一些对应的问题，因为自己是新手，很多都不懂呀，还要麻烦老师。
1)用未染色的样品进行电压和增益调节，使菌再一个较好的位置。但是发现的问题是，用LOG会使菌偏右上，而用LIN则菌会在较左下的位置，不管怎么改变电压增益，都不能集中到中部，这个问题一直困扰我很久。而且用LIN时，我的阈值是用的100，而LOG时用到30时才会有菌出现；
2）第二步，第三步分别是用SYTO 9单染的菌和PI单染的菌上样，调节FL1、FL3的电压使其落在10E1偏右及偏上的位置。我在想这一步是不是其实可以就用未染色的完成呢，用阳性上样这个其实只是起到验证作用呢？
3）这些都完成好了就可以直接上样品了。
请问老师我这样做是否可行呢？谢谢老师了

zml · 发表于 2013-4-25 17:14:55

niwanmao 发表于 2013-4-24 22:39

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是斜着画，但是还是画不规则门更好，十字门你这个比例计算麻烦。

老师能否帮忙看下我的方法可行么，谢谢了呀

zml · 发表于 2013-4-25 17:49:15

niwanmao 发表于 2013-4-25 17:38

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1、log和lin的阈值不一样是正常的，因为两者的坐标本身就不一样。
2、调节电压可以用阴性细胞即可，但是不 ...

恩，好的呀·，谢谢老师了

zml · 发表于 2013-4-27 09:46:47

aivy 发表于 2013-4-26 09:53

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我用的是E00的电压，log，通道是FL1和FL2，这个和用通道FL3的会有区别么？

也可以用FL2的，但是贝克曼的工程师说FL3是他们的最佳获取PI荧光的通道，机子不同就不一样。

zml · 发表于 2013-4-27 11:50:54

aivy 发表于 2013-4-26 09:53

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我用的是E00的电压，log，通道是FL1和FL2，这个和用通道FL3的会有区别么？

请问阈值设置的是多少呢

zml · 发表于 2013-4-27 13:42:21

niwanmao 发表于 2013-4-27 13:16

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bd的机器和coulter的机器阈值还是会有不一样的，不过还是请@aivy 介绍一下经验 ...

恩，老师，对于阈值我一直觉得很难把握，觉得设置过高本来样品时足够的，但是收集到的却很少，若低又怕碎片过多。我在想，是否可以一般将阈值设置相对低点，后再通过设门来解决碎片的问题呢？

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