猪因其生理结构与人类高度相似，已成为研究人类疾病、疫苗开发及毒理学的关键大型动物模型。此外，作为全球主要肉用畜种，猪的健康管理对畜牧业至关重要。

然而，猪免疫系统的研究一直受到较多限制：
1. 抗体限制：多数猪CD分子抗体为未标记或需二抗，导致实验步骤繁琐、跨实验室结果可比性差。  
2. 样本处理复杂：传统方法需多次洗涤，易造成细胞丢失或激活。  

Riccardo Arrigucci等人介绍了一种8色全血流式细胞术方案，旨在高效、精准地量化猪淋巴细胞亚群和单核细胞，为免疫监测提供标准化工具。
- 全商业化试剂：采用直接标记的一抗，避免二抗或自标记步骤。  
- “裂解-免洗”流程：简化操作，减少人为误差。  
- 多激光兼容性：适配常规3-4激光流式细胞仪，提升适用性。  


样本处理与染色  
样本类型：新鲜全血或EDTA抗凝血（4℃保存≤24小时）。  

关键步骤：  
- 抗体混合：按表1组合加入预优化浓度的抗体，室温避光孵育20分钟。  
- 红细胞裂解：使用BD Pharm Lyse™裂解10分钟，300×g离心去碎片。  
- 死细胞标记：Live/Dead Aqua染料避光孵育10分钟，排除死细胞干扰。  

表1 抗体组合与荧光标记  




设门策略

• T细胞：CD3ε⁺ → αβ T（TCRγδ⁻）与γδ T（TCRγδ⁺）。  
  

- B细胞：CD3ε⁻CD21⁺（成熟B细胞）。  
- NK细胞：CD3ε⁻CD8α弱阳性（需复核CD3阴性门）。  

应用场景与方案优势  
1、疫苗与药物开发  
- 监测疫苗诱导的记忆T细胞扩增（CD4⁺CD8α⁺），评估免疫保护效果。  
- 量化细胞毒性T细胞（CTL），解析药物对免疫杀伤功能的影响。  

2、疾病监测与动物健康管理  
- 通过γδ T细胞比例（占比高且随年龄变化），评估猪群免疫状态。  
- 结合血细胞计数仪（如ADVIA 2120i），实现绝对细胞计数（双平台法）。  

3、方案优势总结  
- 高重现性：CV值<15%（经重复实验验证）。  
- 灵活性：可扩展标记（如CD27细分记忆亚群）。  


注意事项  
- MAC320抗体仅识别78%的γδ T细胞，需结合CD3ε⁺确认。  
- CD21标记遗漏部分未成熟B细胞（需CD79α破膜染色补充）。  

参考文献：Arrigucci R, Patterson A, Dube P. OMIP-107: 8-color whole blood immunophenotyping panel for the characterization and quantification of lymphocyte subsets and monocytes in swine. Cytometry A. 2024;105(10):737-740. doi:10.1002/cyto.a.24897